田基黃抗腫瘤活性成分與含量測(cè)定方法研究.pdf

1、田基黃Hypericum japonicum Thunb.,系藤黃科(Guttiferae)金絲桃屬(Hypericum L.)植物,為一年生小草本,廣泛分布于我國(guó)長(zhǎng)江流域及其以南各地。
　　 田基黃提取物被制成注射液和糖漿用于治療肝炎、原發(fā)性肝癌等。有文獻(xiàn)報(bào)道田基黃及其注射液對(duì)多種腫瘤細(xì)胞有抑制作用,而對(duì)正常細(xì)胞無(wú)毒副作用,然而什么是田基黃抗腫瘤作用的活性成分尚無(wú)報(bào)道。因此,本研究以MTT法為藥理指標(biāo),采用體外抗腫瘤活性跟蹤與

2、化學(xué)分離相結(jié)合的方法,確定了田基黃的抗腫瘤活性成分,并以其為指標(biāo)對(duì)田基黃藥材進(jìn)行質(zhì)量控制。
　　 采用80％乙醇對(duì)田基黃藥材進(jìn)行提取,依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取,得到不同部位萃取物,抗腫瘤活性測(cè)定顯示:氯仿萃取層對(duì)Bel-7402和Hela,細(xì)胞株有一定的抑制作用,IC50值分別為151.4μg·mL-1和174.9μg·mL-1。因此確定田基黃乙醇提取物的氯仿萃取層為抗腫瘤活性部位。
　　 取田基黃干燥全

3、草5kg粉碎,過(guò)20目篩,用80％乙醇回流提取,氯仿萃取得到活性部位后,進(jìn)行反復(fù)硅膠柱層析、聚酰胺柱層析、Sephadex LH-20柱層析和制備液相等多種手段對(duì)其化學(xué)成分進(jìn)行分離、純化。從該活性部位中分離得到7個(gè)化合物,經(jīng)理化性質(zhì)和光譜分析分別鑒定為:槲皮素-7-O-α-L-鼠李糖苷、異槲皮苷、小麥黃素、異巴西紅厚殼素、槲皮素、金絲桃苷和槲皮苷。其中小麥黃素為首次從田基黃中分離得到。
　　 采用MTT法對(duì)以上7個(gè)化合物進(jìn)行抗腫

4、瘤活性分析,結(jié)果表明:小麥黃素和異巴西紅厚殼素對(duì)Bel-7402,Hela,Colo,A549,SGC-7901和Heps等6種體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞具有明顯的抑制作用。小麥黃素對(duì)以上6種腫瘤細(xì)胞的IC50為7.61～20.4μg·mL-1。異巴西紅厚殼素對(duì)以上6種腫瘤細(xì)胞的IC50為3.86～8.52μg·mL-1。由此可以推測(cè)小麥黃素和異巴西紅厚殼素為田基黃抗腫瘤作用的重要活性成分。
　　 建立了測(cè)定田基黃中抗腫瘤活性物質(zhì)異巴西

5、紅厚殼素含量的反相高效液相色譜法,采用Zorbax SB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)柱,流動(dòng)相為乙腈-0.04％磷酸水(47:53,v/v),流速為1.0 mL·min-1,檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm,柱溫為30℃。異巴西紅厚殼素線性范圍1.68～56 mg·L-1,r=0.9997(n=6)；平均回收率為101.5％(RSD=2.5％,n=9)。該方法簡(jiǎn)便、快速、精密度好,可為田基黃的質(zhì)量控制提供指標(biāo)。
　　 建

6、立了田基黃中異槲皮苷、槲皮苷、槲皮素-7-O—α-L-鼠李糖苷和槲皮素等4種黃酮同時(shí)含量測(cè)定的反相高效液相色譜法,采用Zorbax SB-C18色譜柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.5％(v/v)HAc水溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫,流速為1.0 mL·min-1,檢測(cè)波長(zhǎng)為360 nm,柱溫為35℃。異槲皮苷、槲皮苷、槲皮素-7-O-α-L-鼠李糖苷和槲皮素濃度分別在6.09～203 mg·L-1、18.93～631