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文檔簡介
1、癌癥是當(dāng)前嚴(yán)重影響人類健康、威脅人類生命的主要疾病之一。近年來,以細(xì)胞周期為藥物靶點(diǎn)進(jìn)行篩選,已成為當(dāng)今抗癌藥研發(fā)的重要方向。中草藥在中國已有幾千年的藥用歷史,其結(jié)構(gòu)多樣性和復(fù)雜性的優(yōu)勢一直受到藥物開發(fā)者的青睞。在此基礎(chǔ)上篩選了來源于40種植物的2000多個(gè)餾分,對(duì)其進(jìn)行細(xì)胞毒活性評(píng)價(jià),發(fā)現(xiàn)小槐花60%乙醇提取物的大孔樹脂95%洗脫餾分中間極性部分具有良好的細(xì)胞毒活性。因此對(duì)活性部位進(jìn)行了活性成分的研究。
本文綜合運(yùn)用硅膠
2、柱層析、ODS柱層析、Sephadex LH-20柱層析以及反相HPLC等多種色譜學(xué)分離手段,對(duì)小槐花60%乙醇提取物的大孔樹脂95%乙醇洗脫部分的化學(xué)成分進(jìn)行了研究,從中分離得到化合物22個(gè)。通過理化性質(zhì)和現(xiàn)代波譜學(xué)手段(UV、MS、1H-NMR、13C-NMR和2D-NMR)鑒定了它們的結(jié)構(gòu)。包含黃酮類化合物14個(gè),三萜類化合物4個(gè),甾醇類化合物兩個(gè)和生物堿類化合物2個(gè)。其中四個(gè)黃酮化合物9、11、21、22為新化合物,除化合物6外
3、,所有化合物均為從該種植物中首次分離得到。
本文通過MTT實(shí)驗(yàn)對(duì)小槐花中分離到的化合物進(jìn)行抗腫瘤活性篩選,發(fā)現(xiàn)化合物7、10、11、14在100 gM條件下對(duì)宮頸癌細(xì)胞HeLa、人肝癌細(xì)胞SMMC-7721、人表皮癌細(xì)胞A431三種人癌細(xì)胞具有明顯的抗腫瘤活性,Giemsa染色進(jìn)一步說明了這4個(gè)化合物對(duì)人上皮癌細(xì)胞有抗腫瘤活性,且具有濃度依賴性。為了進(jìn)一步探索黃酮類化合物于癌細(xì)胞周期的關(guān)系,通過流式細(xì)胞術(shù)PI染色法、Wes
4、tern Blotting研究發(fā)現(xiàn),三個(gè)活性黃酮化合物化合物7、10、11在50μM濃度條件下對(duì)A431人上皮癌細(xì)胞有明顯的G1/S期阻滯現(xiàn)象,顯著抑制G1期相關(guān)蛋白CDK4、CDK6、Cyclin D1,且新黃酮化合物11抑制最為顯著。通過進(jìn)一步計(jì)算機(jī)模擬對(duì)接發(fā)現(xiàn),三個(gè)活性黃酮化合物7、10、11能夠與CDK4蛋白很好的模擬對(duì)接。這些結(jié)果說明小槐花發(fā)揮抗癌活性功能的主要物質(zhì)基礎(chǔ)可能為黃酮類化合物,這些黃酮化合物通過抑制細(xì)胞周期G1期相
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