肺氣虛證與肺陰虛證患者T淋巴細(xì)胞基因表達(dá)的對(duì)比研究.pdf

1、目的：通過(guò)基因芯片研究肺氣虛證和肺陰虛證患者T淋巴細(xì)胞基因表達(dá)的差異，從基因分子水平闡述肺氣虛證與肺陰虛證的物質(zhì)基礎(chǔ)和科學(xué)內(nèi)涵。 方法：采集肺氣虛證、肺陰虛證患者和正常人的外周血作為實(shí)驗(yàn)血樣和對(duì)照血樣。用Ficoll技術(shù)分離外周血淋巴細(xì)胞,然后用流式細(xì)胞儀分選并純化T細(xì)胞，并采用一步法提取總RNA,逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA探針,熒光染料標(biāo)記后,采用人類(lèi)全基因表達(dá)譜芯片進(jìn)行芯片雜交,掃描后篩選出差異表達(dá)基因。 結(jié)果: ①肺氣虛證

2、/正常人外周血T細(xì)胞相關(guān)差異表達(dá)基因45條,其中上調(diào)41條，下調(diào)4條；②肺陰虛證/正常人差異表達(dá)基因32條,其中上調(diào)19條，下調(diào)13條；③肺氣虛證/肺陰虛證差異表達(dá)基因42條,其中上調(diào)27條,下調(diào)16條；④肺氣虛證、肺陰虛證/正常人均高表達(dá)的差異基因5條；⑤肺氣虛證組/正常人組和肺氣虛證組/肺陰虛證組均高表達(dá)的差異基因15條。 結(jié)論 1.基因芯片技術(shù)能有效地研究中醫(yī)證的基因表達(dá)譜，利用該技術(shù)研究肺系疾病相關(guān)證候本質(zhì)的方法

3、是可行的。 2.肺氣虛證與肺陰虛證的T細(xì)胞相關(guān)差異表達(dá)基因改變涉及免疫、酶、核酸合成、細(xì)胞凋亡、結(jié)構(gòu)蛋白、細(xì)胞周期調(diào)節(jié)、運(yùn)輸、離子通道、信號(hào)傳導(dǎo)等多方面，主要為免疫蛋白、酶和運(yùn)輸相關(guān)基因,肺氣虛證和肺陰虛證實(shí)質(zhì)涉及T細(xì)胞的基因表達(dá)譜改變。 3.肺氣虛證與肺陰虛證T細(xì)胞相關(guān)差異表達(dá)基因的變化有很大不同，反映了這兩種病證類(lèi)型存在本質(zhì)的差異，但同時(shí)它們之間也有共同的基因表達(dá)譜改變，如PF4、IGKC、DEFA1、GNLY、 H

4、LA等基因表達(dá)有顯著差異，其中PF4基因表達(dá)下調(diào),IGKC、DEFA1、GNLY、 HLA基因表達(dá)上調(diào)，表明兩證具有共性的免疫基因組學(xué)基礎(chǔ)和證候間內(nèi)在的聯(lián)系, 是諸多相關(guān)基因異常表達(dá)的綜合結(jié)果。 4. 肺氣虛證組和肺陰虛證組均高表達(dá)的5條差異基因中，與血紅蛋白運(yùn)輸有關(guān)的3條基因?yàn)镠BB、 HBA1 、HBA2；而與運(yùn)輸有關(guān)基因TXNDC5在肺氣虛證組高表達(dá)，在肺陰虛證組低表達(dá)，其異常表達(dá)均可能導(dǎo)致血紅蛋白運(yùn)輸障礙。本課題首次從基