水中細菌總數(shù)的測定和大腸菌群的檢測

1、水中細菌總數(shù)的測定和大腸菌群的檢測（ 水中細菌總數(shù)的測定和大腸菌群的檢測（1）錄入時間:2010-9-25 11:17:29 來源：生物信息網(wǎng)（一)實驗目的(1)了解和學習水中細菌總數(shù)和大腸菌群的測定原理和測定意義。(2)學習和掌握用稀釋平板計數(shù)法測定水中細菌總數(shù)的方法。(3)學習和掌握水中大腸菌群的檢測方法。（二)實驗原理水是微生物廣泛分布的天然環(huán)境。各種天然水中常含有一定數(shù)量的微生物。水中微生物的主要來源有：水中的水生性微生物(如光

2、合藻類)、來自土壤徑流、降雨的外來菌群和來自下水道的污染物和人畜的排泄物等。水中的病原菌主要來源于人和動物的傳染性排泄物。水的微生物學的檢驗，特別是腸道細菌的檢驗，在保證飲水安全和控制傳染病上有著重要意義，同時也是評價水質狀況的重要指標。國家飲用水標準規(guī)定，飲用水中大腸菌群數(shù)每升中不超過 3 個，細菌總數(shù)每 mL 不超過 100 個。所謂細菌總數(shù)是指 1mL 或 1g 檢樣中所含細菌菌落的總數(shù)，所用的方法是稀釋平板計數(shù)法，由于計算的是平

3、板上形成的菌落(colony-forming unit，cfu)數(shù)，故其單位應是 cfu/g(mL)。它反映的是檢樣中活菌的數(shù)量。所謂大腸菌群，是指在 37℃24h 內能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸、產(chǎn)氣的兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿菌的總稱，主要由腸桿菌科中四個屬內的細菌組成，即埃希氏桿菌屬、檸檬酸桿菌屬、克雷伯氏菌屬和腸桿菌屬。水的大腸菌群數(shù)是指 100mL 水檢樣內含有的大腸菌群實際數(shù)值，以大腸菌群最近似數(shù)(MPN)表示。在正常情況下，腸道中主要

4、有大腸菌群、糞鏈球菌和厭氧芽胞桿菌等多種細菌。這些細菌都可隨人畜排泄物進入水源，由于大腸菌群在腸道內數(shù)量最多，所以，水源中大腸菌群的數(shù)量，是直接反映水源被人畜排泄物污染的一項重要指標。目前，國際上已公認大腸菌群的存在是糞便污染的指標。因而對飲用水必須進行大腸菌群的檢查。水中大腸菌群的檢驗方法，常用多管發(fā)酵法和濾膜法。多管發(fā)酵法可運用于各種水樣的檢驗，但操作繁瑣，需要時間長。濾膜法僅適用于自來水和深井水，操作簡單、快速，但不適用于雜質較多

5、、易于阻塞(2)細菌總數(shù)的測定：1)水樣稀釋及培養(yǎng)：①按無菌操作法，將水樣作 10 倍系列稀釋：⑦根據(jù)對水樣污染情況的估計，選擇 2-3 個適宜稀釋度(飲用水如自來水、深井水等，一般選擇 1、1:10 兩種濃度；水源水如河水等，比較清潔的可選擇 1:10、1:100、1:1000 三種稀釋度；污染水—被選擇 1:100、1:1000、1:10000 三種稀釋度)，吸取 1mL 稀釋液于滅菌平皿內，每個稀釋度作 3 個重復。③將熔化后保溫

6、度 45℃的牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基倒平皿，每皿約 15mL，并趁熱轉動平皿混合均勻。④待瓊脂凝固后，將平皿倒置于 37℃培養(yǎng)箱內培養(yǎng) 24±1h 后取出，計算平皿內菌落數(shù)目，乘以稀釋倍數(shù)，即得 1mL 水樣中所含的細菌菌落總數(shù)。2)計算方法：作平板計數(shù)時，可用肉眼觀察，必要時用放大鏡檢查，以防遺漏。在記下各平板的菌落數(shù)后，求出同稀釋度的各平板平均菌落數(shù)。3)計數(shù)的報告：①平板菌落數(shù)的選擇：選取菌落數(shù)在 30-300 之間的平板

7、作為菌落總數(shù)測定標準。一個稀釋度使用兩個重復時，應選取兩個平板的平均數(shù)。如果一個平板有較大片狀菌落生長時，則不宜采用，而應以無片狀菌落生長的平板計數(shù)作為該稀釋度的菌數(shù)。若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，可計算半個平板后乘2 以代表整個平板的菌落數(shù)。②稀釋度的選擇：a. 應選擇平均菌落數(shù)在 30-300 之間的稀釋度，乘以該稀釋倍數(shù)報告之(表 1 例 1)。b．若有兩個稀釋度，其生長的菌落數(shù)均在 30-300 之間，