大腸菌群快速檢測培養(yǎng)基的研制及評價.pdf

1、背景及目的：大腸菌群作為評價食品衛(wèi)生質(zhì)量的重要指標(biāo)之一,已被廣泛的應(yīng)用于食品衛(wèi)生領(lǐng)域,它不僅能反映被檢測物是否被污染及受污染程度,而且在一定程度上也能反映出食品在生產(chǎn)、加工、運輸及儲存等過程中的衛(wèi)生狀況,其檢出具有重要的微生物學(xué)意義。我國的食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗國家標(biāo)準(zhǔn)(GB4789)系列中,大腸菌群的測定常常作為必檢項目。目前,對于大腸菌群的檢測有很多類方法,最為廣泛采用的仍是國標(biāo)三步法檢測,此法具有準(zhǔn)確、可靠等優(yōu)點,但檢測周期長,操作

2、繁瑣,耗時費力,且不能滿足快速檢測的需求,所以尋求快速、準(zhǔn)確、并且操作簡單的大腸菌群檢測方法,是食品安全部門亟待解決的問題。上世紀(jì)末法國科瑪嘉公司發(fā)明的顯色培養(yǎng)基技術(shù)從一定程度上解決了關(guān)于微生物常規(guī)檢測中出現(xiàn)的難題,目前國內(nèi)使用最多的是進(jìn)口的大腸菌群顯色培養(yǎng)基產(chǎn)品,價格昂貴,成本高,而且配制過程中對溫度、實驗環(huán)境等外在因素要求比較嚴(yán)格,因此不適用于現(xiàn)場檢測工作。為了滿足國內(nèi)食品檢驗對大腸菌群快速檢測培養(yǎng)基的實際需求,本課題利用微生物所具

3、有的特異性酶及其相對應(yīng)的顯色底物研制出一種能快速檢測大腸菌群的鑒別顯色培養(yǎng)基,并對其實際應(yīng)用價值進(jìn)行評價,以期獲得快速、準(zhǔn)確、敏感度高、特異性強(qiáng)并且適用于實時監(jiān)測工作的經(jīng)濟(jì)型檢測產(chǎn)品。
　　 方法：以初步篩選的普通營養(yǎng)瓊脂平板為基礎(chǔ),添加促大腸菌群生長和抑制雜菌生長等物質(zhì),如瓊脂、蛋白胨、酵母粉、乳糖、氯化鈉、月桂基硫酸鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀等,同時設(shè)計相應(yīng)的酶顯色底物及添加方式,通過兩組正交優(yōu)化實驗,確定其最終配方,形成大

4、腸菌群顯色培養(yǎng)基平板(ColiformChromogenic Medium)以下簡稱為CCM。
　　 觀察培養(yǎng)基的顯色效果,以大腸菌群標(biāo)準(zhǔn)菌株及其他食源性致病菌標(biāo)準(zhǔn)菌株、100份實際食物樣品為對象:準(zhǔn)確可靠的國標(biāo)檢測法為參考,從檢測時間及成本、平板效率、特異性、敏感度和準(zhǔn)確性等方面綜合評價該顯色培養(yǎng)基的性能。
　　 結(jié)果：
　　 ①該培養(yǎng)基在37℃培養(yǎng)18h就可直接觀察菌落顏色來鑒別大腸菌群菌屬,顯色清晰,結(jié)果易

5、于觀察,并且檢測成本明顯低于現(xiàn)有的大腸菌群國標(biāo)檢測法。
　　 ②該顯色培養(yǎng)基與國標(biāo)法中采用的鑒別培養(yǎng)基結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊臘(VRBA)的出菌率即平板效率對比,差異無顯著性(t=0.578,P＞0.05)。
　　 ③該顯色培養(yǎng)基的特異性和敏感度分別能達(dá)到100％和90%,證實具有較高的敏感度和特異性。
　　 ④用實際食物樣品進(jìn)行評價,該方法與國標(biāo)法的檢測準(zhǔn)確性比較,差異無顯著性(X2=0.125,P＞0.05)。<