沙門菌快速檢測顯色培養(yǎng)基的研制與應(yīng)用.pdf

1、背景及目的:
　　 沙門菌（Salmonella）是一種主要的人畜共患病原菌，在自然界中分布廣泛，對人類和動物均具有極大危害。在全世界的細菌性食物中毒病例中，沙門菌所引起的中毒例數(shù)明顯多于其它細菌，是我國乃至世界上細菌性腹瀉最主要的病原菌之一，是引起食源性疾病的首要因素。按照國際慣例，應(yīng)將易被沙門菌污染的食品進行分類管理，以此有效地預(yù)防由于沙門菌引起的疾病。沙門菌的檢測作為食品衛(wèi)生與質(zhì)量檢測的一項重要指標，已被世界各國應(yīng)用于食品

2、檢測中。目前，食品中沙門菌的檢測方法種類繁多，應(yīng)用最為廣泛的仍是沙門菌國標法檢測法，該方法的檢測結(jié)果準確、可靠，但檢測周期較長，操作繁瑣，不能滿足現(xiàn)場快速檢測的要求。建立一種能夠滿足結(jié)果準確、易操作、易保存、價格低廉的快速檢測方法，并具有較好的普及推廣性成為亟待解決的課題?，F(xiàn)今國內(nèi)已有部分微生物檢測顯色培養(yǎng)基投入使用，這些培養(yǎng)基產(chǎn)品主要為國外進口產(chǎn)品，但價格昂貴，檢測成本過高，在國內(nèi)大范圍推廣使用受到限制。為滿足國內(nèi)對沙門菌快速檢測顯色

3、培養(yǎng)基的迫切需求，本課題利用微生物的特異性酶和與之相對應(yīng)的顯色底物，研制出能夠快速檢測面制品中沙門菌的顯色培養(yǎng)基，并對其檢測效果進行評價，以期獲得符合面制品現(xiàn)場檢測要求，并具有較高的靈敏度和特異性的經(jīng)濟型沙門菌快速檢測產(chǎn)品。
　　 方法:
　　 以普通營養(yǎng)瓊脂平板為基礎(chǔ)，添加促進沙門菌生長和抑制其它菌屬生長的物質(zhì):瓊脂、蛋白胨、酵母膏粉、氯化鈉、月桂基硫酸鈉、碳酸鈉、L-胱氨酸，通過正交優(yōu)化實驗，確定基礎(chǔ)培養(yǎng)基的成分和濃

4、度，通過單因素分析確定酶顯色底物濃度，最終確定配方，制得沙門菌快速檢測顯色培養(yǎng)基（RapiddetectionofSalmonellaChromogenicMedium,RSCM）。
　　 以沙門菌國標檢測法為比照，分析沙門菌快速檢測顯色培養(yǎng)基的顯色效果、出菌率、相關(guān)性、特異性、靈敏度，結(jié)合檢出時間及成本等方面綜合評價RSCM的檢測性能。
　　 結(jié)果:
　　 ①RSCM在36℃±1℃培養(yǎng)12h即可通過觀察菌落顏色

5、直接鑒別沙門菌菌屬，顯色清晰穩(wěn)定，結(jié)果易于觀察。
　　 ②RSCM與國標檢測法中采用的木糖賴氨酸脫氧膽鹽瓊脂(XyloseLysineDeoxycholateAgar，XLD)培養(yǎng)基、亞硫酸鉍瓊脂(BismuthSulfiteAgar,BS)培養(yǎng)基的出菌率對比，差異無統(tǒng)計學意義(F=0.757，P＞0.05)。
　　 ③RSCM與國標檢測法中采用的XLD培養(yǎng)基和BS培養(yǎng)基進行相關(guān)性分析，關(guān)系數(shù)分別為0.996、0.997

6、，相關(guān)程度較高，在沙門菌菌落計數(shù)精確度方面RSCM平板與另外兩種培養(yǎng)基平板效果相當。
　　 ④RSCM與沙門菌國標檢測法相比，有較高的特異性和靈敏度，并且在檢測成本和檢測時間方面優(yōu)于國標檢測法。
　　 ⑤RSCM與沙門菌國標檢測法對于食品樣品的檢測差異無統(tǒng)計學意義，且RSCM無需輔助檢測設(shè)備，價格便宜、操作簡便、檢測結(jié)果準確可靠。
　　 結(jié)論:
　　 自主研制的沙門菌快速檢測顯色培養(yǎng)基在性能上與沙門菌國標