細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)操作

1、1.什么是細(xì)胞工程細(xì)胞工程按照一定的設(shè)計(jì)方案，通過在細(xì)胞、亞細(xì)胞或組織水平上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，獲得重構(gòu)的細(xì)胞、組織、器官以及個(gè)體，創(chuàng)造優(yōu)良品種和產(chǎn)品的綜合性生物工程。細(xì)胞工程所涉及的范圍很廣，按生物類型可以分為動(dòng)物細(xì)胞工程、植物細(xì)胞工程和微生物細(xì)胞工程，按實(shí)驗(yàn)操作對(duì)象可以分為細(xì)胞與組織培養(yǎng)、動(dòng)物融合、細(xì)胞核移植、染色體操作、轉(zhuǎn)基因生物等。以細(xì)胞工程為基礎(chǔ)，發(fā)展派生出了不少以工程冠名的新領(lǐng)域，如組織工程、胚胎工程、染色體工程等。2.什么是消毒

2、disinfection是指殺滅或去除外環(huán)境中媒介物攜帶的病源微生物的過程。3.什么是干細(xì)胞stemcell干細(xì)胞是指具有自我更新和分化潛能的細(xì)胞。4.什么是細(xì)胞融合cellfusion又稱細(xì)胞雜交，是指兩個(gè)或兩個(gè)以上的細(xì)胞融合形成一個(gè)細(xì)胞的過程。5.什么是細(xì)胞培養(yǎng)cellculture是指生物細(xì)胞在離體條件下的生長和增殖，細(xì)胞的離體培養(yǎng)稱為細(xì)胞培養(yǎng)。6.基因治療genetherapy指將外源功能性目的基因?qū)牖颊唧w內(nèi)，通過調(diào)控目的基因

3、表達(dá)，抑制、替代或補(bǔ)償缺陷基因，從而恢復(fù)受累細(xì)胞、組織或器官的生理功能，達(dá)到疾病治療目的。7.轉(zhuǎn)基因動(dòng)物transgenicanimal借助基因工程技術(shù)將外源基因?qū)胧荏w動(dòng)物染色體內(nèi)，外源基因與動(dòng)物基因整合后歲細(xì)胞的分裂而擴(kuò)增，在體內(nèi)表達(dá)并能穩(wěn)定的遺傳給后代的動(dòng)物。8.ES細(xì)胞embryonicstemcell當(dāng)細(xì)胞團(tuán)的細(xì)胞分離出來進(jìn)行培養(yǎng)，在一定條件下這些細(xì)胞可在體外“無限期”地增殖傳代，同時(shí)還保持其全能性。這種干細(xì)胞稱為胚胎干細(xì)胞即

4、ES細(xì)胞。他是一種高度未分化細(xì)胞，具有發(fā)育的全能性，能分化出成體動(dòng)物的所有組織和器官，包括生殖細(xì)胞。9.什么是克隆clone克隆是指生物體通過體細(xì)胞進(jìn)行的無性繁殖，以及由無性繁殖形成的基因型完全相同的后代個(gè)體組成的種群。10.什么是染色體Chromosome染色體是細(xì)胞內(nèi)具有遺傳性質(zhì)的物體易被堿性染料染成深色所以叫染色體(染色質(zhì))其本質(zhì)是脫氧核甘酸.11.什么是細(xì)胞污染cellcontamination在細(xì)胞培養(yǎng)中，凡是與培養(yǎng)無關(guān)的雜質(zhì)

5、的混入培養(yǎng)系統(tǒng)稱為污染二、簡答題1.重組DNA技術(shù)的一般步驟（1）目的基因的獲取目前，獲取目的基因的方法主要有三種：反向轉(zhuǎn)錄法、從細(xì)胞基因組直接分離法和人工合成法。（2）DNA分子的體外重組體外重組是把載體與目的基因進(jìn)行連接。數(shù)法（3）比濁法。2活菌計(jì)數(shù)法（平板菌落記數(shù)法）：是通過測(cè)定樣品在培養(yǎng)基上形成的菌落數(shù)來間接確定其活菌數(shù)的方法故又稱平板計(jì)數(shù)法（1）涂布平板法（2）倒平板法3濾膜過濾法：樣品同過微孔濾膜后，細(xì)菌收集在濾膜上，然后將

6、濾膜放在培養(yǎng)基中培養(yǎng)，通過菌落計(jì)數(shù)求出樣品活菌落。(2)微生物生長量和生理指標(biāo)的測(cè)定方法測(cè)定微生物生長量及相關(guān)的生理指標(biāo)，常用以下方法：1濕重法2干重法(3)測(cè)定含氮量（2）測(cè)定DNA（3）其他生理指標(biāo)：如測(cè)定碳、磷、RNA、ATP、DAP(二氨基庚二酸)的含量等。4、細(xì)胞培養(yǎng)中消毒的原則是什么體外培養(yǎng)細(xì)胞缺乏抗感染能力，所以防止污染是決定培養(yǎng)成功或失敗的首要條件。1.培養(yǎng)前準(zhǔn)備根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，將所需器具和材料準(zhǔn)備好，以合適的方法進(jìn)行消毒

7、和滅菌。2.操作室消毒無菌培養(yǎng)室每天都要用1‰的新潔爾滅拖洗地面―次(拖布要專用).紫外線照射消毒3050min，超凈工作臺(tái)臺(tái)面每次實(shí)驗(yàn)前要用75％酒精擦洗。然后紫外線淌毒30min。在工作臺(tái)面消毒時(shí)切勿將培養(yǎng)細(xì)胞和培養(yǎng)用液同時(shí)照射紫外線，消毒時(shí)工作臺(tái)面上用品不要過多或重疊放置，―些操作用具如移液器、廢液缸、污物盒、試管架等用75%酒精擦洗后置于臺(tái)內(nèi)同時(shí)紫外線消毒。3.洗手和著裝平時(shí)僅做觀察不做培養(yǎng)操作時(shí)，可穿裝細(xì)胞培養(yǎng)室內(nèi)紫外線照射3

8、0min的清潔工作服。在利用超凈臺(tái)工作時(shí)，前臂要伸入箱內(nèi)，應(yīng)著長袖的清潔工作服，操作前要用75％酒精消毒手。出入培養(yǎng)室都要重新用消毒液洗手。進(jìn)入原代培養(yǎng)室需徹底洗手還要戴口罩、著消毒衣帽。4.無菌培養(yǎng)操作在無菌環(huán)境進(jìn)行培養(yǎng)或做其它無菌工作時(shí)，首先要點(diǎn)燃酒精燈或煤氣燈。以后一切操作都需在火焰近處并經(jīng)過燒灼進(jìn)行。金屬器械不能在為焰中燒的時(shí)間過長，以防退火，燒過的金屬鑷要待冷卻后才能挾取組織，以免造成組織損傷。吸取過營養(yǎng)液后的吸管不能再用火焰

9、燒灼，再用時(shí)會(huì)把有害物帶入營養(yǎng)液中。開啟、關(guān)閉長有細(xì)胞的培養(yǎng)瓶時(shí)，火焰滅菌時(shí)間要短。防止因溫度過高燒死細(xì)胞。另外膠塞過火焰時(shí)也不能時(shí)間長，以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體，危害培養(yǎng)細(xì)胞。進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，動(dòng)作要準(zhǔn)確敏捷，但又不必太快，以防空氣流動(dòng)，增加污染機(jī)會(huì)。不能用手觸及已消毒器皿，如已接觸，要用火焰燒灼消毒或取備品更換。原則上應(yīng)是右手使用的東西放置在右側(cè)，左手用品在左側(cè)，酒精燈置于中央。組織或細(xì)胞在未做處理之前，勿過早暴露在空氣中。同樣，培養(yǎng)液在未用