水稻矮縮病毒在水稻懸浮細(xì)胞中的表達(dá)動(dòng)態(tài).pdf

1、水稻矮縮病毒(rice dwarfvirus，RDV)基因組包含12條雙鏈(double-stranded，ds)RNA，分別編碼了7個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白(structural proteins)，如：P1，P2,P3,P5,P7,P8,P9；5個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白(nonstructural proteins)，如：Pns4．，Pns6，Pns10，Pns11，Pns12。 本試驗(yàn)通過建立水稻懸浮細(xì)胞系，應(yīng)用聚乙二醇(polyethylene

2、glycol，PEG)介導(dǎo)將水稻矮縮病毒接種到水稻懸浮細(xì)胞內(nèi)，在接種的不同時(shí)間取樣，通過酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)和蛋白免疫雜交法(Westernblot)的方法，檢測(cè)RDV在水稻懸浮細(xì)胞中的復(fù)制周期，以及P8,P9蛋白的表達(dá)動(dòng)態(tài)。結(jié)果表明：RDV外殼蛋白在水稻懸浮細(xì)胞體內(nèi)迅速復(fù)制，16h左右達(dá)到復(fù)制的最高峰，在50h左右到達(dá)最低，但在68h左右又所增殖；P8蛋白在4h就能被檢測(cè)到，16h到24h蛋白的表達(dá)量是最大的，而RDV P9蛋

3、白在8h才能檢測(cè)到目的條帶，其表達(dá)量最大值出現(xiàn)的時(shí)間點(diǎn)與P8蛋白是一樣的(24h左右)。 利用地高辛(DIG)標(biāo)記法，制備S8和S9的DNA探針，通過Northern-blot點(diǎn)雜交的方法，研究RDV的S8和S9在水稻懸浮細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄周期。結(jié)果顯示：RDV-S8和S9轉(zhuǎn)錄都在接種后4h就可以檢測(cè)到增加，但是S8在第12h出現(xiàn)轉(zhuǎn)錄的最大值，而且保持了這最大值一直保持到20h：S9的轉(zhuǎn)錄峰值出現(xiàn)在接種后的20h。同時(shí)，利用實(shí)時(shí)熒光定

4、量PCR(Real time-PCR)檢測(cè)了S8-mRNA的轉(zhuǎn)錄，結(jié)果顯示S8-mRNA在24h出現(xiàn)最大積累量，進(jìn)一步證實(shí)Northern-blot的結(jié)果。 通過對(duì)接種后水稻懸浮細(xì)胞的防御酶(POD,PAL,PPO)的測(cè)定，并利用高效液相色譜技術(shù)研究了細(xì)胞生長素(indole acetic acid,IAA)和赤霉素(gibberellin,GA)的變化情況，結(jié)果表明：接種RDV的水稻懸浮細(xì)胞，其防御酶系活性隨著病毒的侵入，都有