對(duì)水稻矮縮病毒傳毒能力存在差異的葉蟬群體mRNA差異表達(dá)分析.pdf

1、水稻矮縮病毒(Rice dwarf virus，RDV)，屬于呼腸孤病毒科(Reoviridae)，植物呼腸孤病毒屬(Phytoreovirus)，是水稻矮縮病的病原，廣泛分布于中國(guó)、日本、朝鮮、菲律賓、尼泊爾等水稻種植區(qū)，給水稻生產(chǎn)造成嚴(yán)重?fù)p失。該病毒可由黑尾葉蟬(Nephotettix cincticeps)作為昆蟲(chóng)介體，它是一種經(jīng)卵以持久方式傳播的病毒。本研究構(gòu)建了兩個(gè)黑尾葉蟬群體，它們對(duì)水稻矮縮病毒傳毒能力有顯著差異。并利用mR

2、NA差異顯示(differential display RT-PCR，DDRT-PCR)技術(shù)對(duì)這兩個(gè)群體進(jìn)行差異分析，找到差異片段，嘗試探討葉蟬高效率傳毒的分子機(jī)制。 在構(gòu)建高低親和性黑尾葉蟬方面，無(wú)毒的黑尾葉蟬經(jīng)過(guò)連續(xù)多代飼毒，傳毒后，得到了對(duì)RDV傳毒效率差異明顯的兩個(gè)黑尾葉蟬群體，通過(guò)生物學(xué)方法鑒定，高親和性黑尾葉蟬群體的發(fā)病率一直保持在90.0％左右。低親和性黑尾葉蟬群體的發(fā)病率維持在1％-4％。高親和性群體在F7代的傳

3、毒率是87.7％，表明基本成功構(gòu)建成一個(gè)高傳毒的葉蟬群體，但是群體的高傳毒特性只是在3個(gè)月無(wú)人工選擇壓力下的結(jié)果，在長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)是否能保持這一搞得傳毒特性還有待進(jìn)一步的生物學(xué)驗(yàn)證。 運(yùn)用mRNA差異顯示技術(shù)篩選高、低親和性黑尾葉蟬群體的差異基因，經(jīng)差異顯示，共篩選出差異條帶42條，挑選差異顯著、重?cái)U(kuò)增效果好的12條進(jìn)行RNA斑點(diǎn)雜交驗(yàn)證，獲得7個(gè)陽(yáng)性片段，其中DD3、DD5、DD6、DD7和DD8等5個(gè)片段為高親和性黑尾葉蟬群體所特

4、有，DD2、DD11兩個(gè)片段為低親和性黑尾葉蟬群體特有。對(duì)陽(yáng)性片段克隆、測(cè)序和同源性比較分析，揭示高親和黑尾葉蟬群體所特有的DD5片段與人類20號(hào)染色體RP11-459I16克隆的DNA序列部分基因同源性高達(dá)99％；DD6片段與RDV的RNA2上的RNA結(jié)合蛋白部分基因同源性達(dá)94％，DD8片段序列與黑腹果蠅泛素部分基因有92％的同源性；DD3和DD7片段序列與已知序列同源性較低，推測(cè)是新的基因片段。DD2和DD11片段序列是低親和性黑