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文檔簡介
1、水稻黑條矮縮病毒(Rice black-streakeddwaf virus,RBSDV),是呼腸孤病毒科斐濟(jì)病毒屬成員,可引起水稻黑條矮縮病、玉米粗縮病等,對(duì)東南亞地區(qū)的水稻、玉米等作物造成了嚴(yán)重危害。目前國內(nèi)外主要是依靠一些分子生物學(xué)方法(如RT-PCR和核酸雜交)檢測(cè)RBSDV,但在實(shí)際生產(chǎn)中這些方法的應(yīng)用受到限制。分子生物學(xué)方法的不足之處是費(fèi)時(shí)以及成本較高,不適于大批量樣品的檢測(cè)。本研究的主要目標(biāo)是發(fā)展一種較RT-PCR方法更為
2、迅速和有效的利用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)RBSDV的方法。
本研究采用RT-PCR方法從感染RBSDV的水稻中克隆該病毒的外殼蛋白基因(Coat Protein,CP),CP基因再亞克隆到原核表達(dá)載體PET-32a中構(gòu)建成重組原核表達(dá)載體pET32a-CP。將重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3),經(jīng)IPTG誘導(dǎo),Ni2+-NTA樹脂親和柱純化獲得蛋白。以純化的重組蛋白為抗原免疫兔子制備RBSDV外殼蛋白的多
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