不同豬群豬圓環(huán)病毒2型的檢測及其全基因序列分析.pdf

1、豬圓環(huán)病毒2型(Porcine circovirus type 2，PCV2)為無囊膜的單股負鏈DNA病毒，屬圓環(huán)病毒科(Circoviridae)成員。PCV2與豬群中發(fā)生的多種傳染性疾病密切相關，如仔豬斷奶后多系統衰竭綜合征(Postwealling multisystemic wasting syndrome，PMWS)、豬皮炎與腎炎綜合征(Porcine dermatitis and nephropathy syndrome，P

2、DNS)、豬呼吸道綜合征(Porcine respiratory disease complex，PRDC)等。PMWS是一種以進行性消瘦和多系統病理損傷為主要特征的免疫抑制性疾病，主要發(fā)生在6-16周齡的斷奶仔豬。該病在我國自2000年首次報道以來，已廣泛流行于全國各省，威脅著我國的養(yǎng)豬業(yè)，并造成了巨大的經濟損失。目前，對健康豬群中感染的PCV2病原學檢測和基因遺傳變異研究尚少有報道。本研究主要包括以下幾方面內容： 1、PCV

3、2套式PCR檢測方法的建立：根據GenBank中已發(fā)表的PCV2全基因序列，設計兩對PCV2特異性引物，建立用于PCV2檢測的套式PCR檢測方法。外側引物p1／p2擴增的基因片段長度為647bp(92nt-738nt)，內側引物p3／p4擴增片段長219bp(319nt-537nt)。經優(yōu)化PCR擴增條件后，第一輪PCR可擴增最低DNA模板濃度為10<'-5>pg／mL；第二輪PCR可擴增最低DNA模板為10<'-8>pg／mL，比第一

4、輪擴增敏感性增加1000倍。通過與常規(guī)PCR對85份來自山東德州地區(qū)臨床發(fā)病豬樣品進行檢測效率的比對試驗，證明本方法的陽性檢出率較高；同時也證明該地區(qū)發(fā)病豬群普遍存在PCV2感染。 2、患病豬群和健康豬群PCV2感染的檢測：應用套式PCR方法，對我國10個省份826份臨床發(fā)病豬肺臟、淋巴結樣品和5個屠宰場146份健康豬淋巴結樣品進行PCV2檢測，結果為：患病豬群和健康豬群PCV2陽性樣品分別為316份和64份，陽性率為38.3％

5、和43.8％。表明我國發(fā)病豬群和健康豬群中普遍存在PCV2感染。 3、患病豬群PCV2檢測陽性樣品中其它病原體檢測：對除甘肅省外的其它9個省份的283份PCV2陽性樣品進行PRRSV、PPV和CSFV的PCR檢測，結果為：CSFV、PRRSV和PPV陽性樣品分別為74份、94份和46份，陽性率分別為26.1％、33.2％和16.3％。表明這些地區(qū)發(fā)病豬群中的雙重感染情況普遍存在。 4、兩類豬群感染的PCV2全基因序列分析