豬圓環(huán)病毒2型檢測(cè)新方法研究.pdf

1、豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)可以引起很多疾病尤其是斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合癥,這種病給世界養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失?，F(xiàn)有的PCV2的檢測(cè)方法雖然對(duì)該病的診斷起到了重要作用,但難以滿足現(xiàn)場(chǎng)實(shí)時(shí)快速檢測(cè)的要求。因此,發(fā)展和建立PCV2早期檢測(cè)新方法對(duì)于該病的檢測(cè)和診斷具有重要意義。本論文結(jié)合化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)(CLIA)、乳膠凝集技術(shù)及熒光顯微鏡技術(shù),采用金標(biāo)單克隆抗體探針、乳膠抗體復(fù)合物探針和量子點(diǎn)熒光探針研究了PCV2的檢測(cè)新方法,主要

2、研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下:
　　 1.合成了金納米粒子并制備了金標(biāo)單克隆抗體,對(duì)二者進(jìn)行了紫外、透射電鏡的表征,研究了納米金溶解及化學(xué)發(fā)光的條件,建立了一種超靈敏、簡(jiǎn)便、快速、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好的Au3+增強(qiáng)的CLIA檢測(cè)PCV2,檢測(cè)限達(dá)到2.67×102 copy/mL。與PCR相比,通過(guò)檢測(cè)36份臨床血清樣本,CLIA檢測(cè)PCV2顯示出了高的靈敏度和可靠性,在臨床分析和控制疾病傳播方面顯示出了更好的前景。
　　 2.合成

3、了帶有磺酸基的三元聚合物乳膠微球,通過(guò)靜電相互作用,將PCV2單克隆抗體吸附到乳膠微球表面形成乳膠抗體復(fù)合物診斷試劑。乳膠抗體復(fù)合物診斷試劑表面抗體與病毒表面抗原發(fā)生特異性反應(yīng),促使分散的乳膠微球凝集在一起,出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集現(xiàn)象,而與去離子水、磷酸緩沖液、豬圓環(huán)病毒1型、豬繁殖與呼吸障礙綜合癥病毒、豬細(xì)小病毒、豬傳染性胃腸炎病毒不出現(xiàn)凝集現(xiàn)象。在最優(yōu)化條件下,病毒濃度檢測(cè)范圍為3.1×105 copy/mL-8.00×107 copy

4、/mL,檢測(cè)限達(dá)到1.0×105 copy/mL。用建立的方法與PCR方法檢測(cè)了34份臨床血清樣本,結(jié)果表明該方法可用于臨床血清樣品的檢測(cè),是一種簡(jiǎn)單、快速、靈敏的PCV2可視化檢測(cè)方法。
　　 3.合成了CdTe量子點(diǎn),并構(gòu)建了CdTe-PCV2單克隆抗體熒光探針。通過(guò)熒光光譜、紫外-可見(jiàn)吸收光譜、動(dòng)態(tài)光散射、瓊脂糖凝膠電泳、熒光顯微鏡等表征手段證明量子點(diǎn)熒光探針具有量子點(diǎn)的熒光特性和單克隆抗體的生物特異性。研究結(jié)果表明CdT