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1、華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文豬Ⅱ型圓環(huán)病毒PCR診斷方法及其全基因組克隆的研究姓名：曹勝波申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：陳煥春2002.5.1ABSTRACTIONPorcineCircovirus(PCV)isasmallnonenveloped，icosahedralmammalianviruscontainingacircularsinglestrandedDNAgenome，whichnowhasbeenassigne
2、dtotheCircoviridaefamilyPCV1wasfirstdescribedin1974byTisherasapicomaviruslikecontaminantofthepermanentpigkidneycellculturePK15(ATCCCCL33)andacceptedtobeanonpathogemicvirusHoweverPCV2hasbeenassociatedwithPostweaningmultis
3、ystemicwastingsyndrome(PMWS)Inthisresearch，wedesignedonepairofprimertodetectPCV2DNAinsamplescomingfromHenanJiangxi，GuangdongandHubeiprovinceTheresultshowsthat12PCV2positivesampleswerefoundin43samplesTheavemgepositiverate
4、is279％HoweverthepositiverateinJiangxiandHenanprovinceis333％Ontheotherhand5sampleswerealsofoundtobecoinfectedwithPPVorPRVOnePCV2wasdetectedfromstillbornpiglets，indicatingthatvertical訂ansmissionofthisvirusmayOCCUrAPCV2，nam
5、edwithYUAstrain，wasisolatedinonesamplefromHenanprovinceThenthepk一15cellsfreeofPCVwereinfectedbyYUAstrainWeCallstilldetectedPCV2DNAinpk15cellsafter25passagesPCRTheplasmidcontainingthewholegenomeDNAWasamplifiedbyanotherinv
6、ersePCRAnalysisofthegenomeofYUAstrainhasshownthatitis1767bpandhasa90％overallnucleotidesequenceidentitywithotherstrainsWithin10ORFs，ORFlandORF2aremajorORFs，whichencode314and213aaThereplicationofPCV2maybeginat“AAGTATTAC”be
7、causethereisonestemloopin1749176713bpSixglycosylationsiteswerefoundinORFI(117126bp，816824bp，906914bp)，ORF2(13011309bp)，ORF4(470—478bp)andORF5(10731081bp)TheputativeviralsinglestrandedDNAformofYUAstraincontainspotentialpo
8、lyedenylationaddition(ployA、signalsequenceatthreeplaces(ntposition327332，983988，10221027)InthisstudywesucceedinfoundingspecialPCRtodetectPCV2intissuesandgetrecombinationplasmidofwholeganomeofYUAstrainItdemonstratesthatPC
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