豬圓環(huán)病毒Ⅰ型、Ⅱ型全基因克隆及其基因交換重組的研究.pdf

1、丫78347E；分類號(hào)UDC$8582853學(xué)位論文密級(jí)學(xué)號(hào)B010702豬圓環(huán)病毒I型、II型全基因克隆及其基因交換重組的研究朱玲指導(dǎo)教師姓名；郭萬(wàn)柱教授(四川農(nóng)業(yè)大學(xué))申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)名稱：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)●______一●______________________________一論文提交日期：2005年6月16日論文答辯日期l2005年6月學(xué)位授予單位和日期t四川農(nóng)業(yè)大學(xué)2005年7月3日答辯委員會(huì)主席：評(píng)閱人：馬用信教授謝慶

2、閣、周蛟、陳溥吉、汪明、王琴2005年6月中文摘要研究中參照豬圓環(huán)病毒(Porcinecircovirus，PCV)的基因組特點(diǎn)，自行分離鑒定PCVl一YAl和PCV2SC株兩個(gè)四川分離株，分別克隆其全基因；采用酶切、連接技術(shù)實(shí)現(xiàn)了兩個(gè)毒株間部分基因交換，即將PCV2的ORFl克隆到PCVI上，構(gòu)建重組病毒疫苗株P(guān)CV卜2；將PCVl的ORFl克隆到PCV2上構(gòu)建重組病毒疫苗株P(guān)CV2一l。并采用單酶切消化、外切酶部分降解等操作構(gòu)建了P

3、CV2部分基因組的真核表達(dá)質(zhì)粒pEGFPCPCV2一SC—A。研究目的在于以期望能篩選研究豬圓環(huán)病毒新型基因工程疫苗，同時(shí)也為開(kāi)展PCV病毒功能基因組學(xué)研究奠定基礎(chǔ)。1豬圓環(huán)病毒I型YAl株的全基因克隆及生物信息學(xué)分析試驗(yàn)中采用1對(duì)特異性引物(P1／P2)，1次性擴(kuò)增獲得了1759bp的豬圓環(huán)病毒I型(PCV卜YAl株)全基因組，將其克隆于pMDl8T質(zhì)粒，構(gòu)建了重組質(zhì)粒pMDl8T—PCVl一YAl并進(jìn)行了核苷酸序列測(cè)定及氨基酸序列推

4、導(dǎo)。PCV卜YAl株與Genbank中公布的其它7個(gè)PCVl毒株間的同源性高達(dá)988—999％。氨基酸序列推導(dǎo)顯示，PCVl一YAl株ORFl編碼312個(gè)氨基酸，在20—22aa(NPS)有一個(gè)糖基化位點(diǎn)；ORF2編碼233個(gè)氨基酸，在102—104aa(NYS)存在一個(gè)糖基化位點(diǎn)。疏水性和跨膜區(qū)分析結(jié)果表明PCVlYAl株的ORFl集中在3個(gè)部分出現(xiàn)9個(gè)潛在疏水性區(qū)域和2個(gè)跨膜區(qū)；ORF2則存在2個(gè)潛在疏水性區(qū)域和1個(gè)跨膜區(qū)。2豬PC

5、V2SC株的分離鑒定及其全基因克隆與生物信息學(xué)分析ELISA檢測(cè)及熒光抗體檢測(cè)確診豬圓環(huán)病毒臨床病例，分離了豬圓環(huán)病毒野毒(PCV2一SC)株。本試驗(yàn)中采用1對(duì)特異性引物(P3／P4)，1次性擴(kuò)增獲得了1767bp的豬圓環(huán)病毒II型PCV2一SC株全基因組，將其克隆于pMDl8一T質(zhì)粒，構(gòu)建了重組質(zhì)粒pMDl8T—PCV2一SC并進(jìn)行了核苷酸序列測(cè)定及氨基酸序列推導(dǎo)。通過(guò)BLAST與GenBank中來(lái)自美洲、歐洲及中國(guó)的部分PCV2毒株