豬圓環(huán)病毒Ⅱ型(福州株)的分離與全基因序列的測定.pdf

1、豬圓環(huán)病毒Ⅱ型(Porcine circovirus type2，PCV2)所引起的疾病是當今養(yǎng)豬業(yè)中嚴重關(guān)切的重大傳染病之一。它能造成豬的生長緩慢，飼料報酬降低，同時侵害豬的免疫系統(tǒng)，導致機體的免疫力下降，引起其他疾病的大爆發(fā)，給世界各國養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展造成了嚴重威脅和巨大的經(jīng)濟損失。PCV2已經(jīng)在世界范圍內(nèi)廣泛存在，現(xiàn)在認為它不僅可以引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(PMWS)，還與豬皮炎腎病綜合征(PDNS)、豬呼吸道疾病綜合征(PRDC

2、)、豬先天性震顫(CT)等疾病密切相關(guān)。PCV2的長度有1767bp和1768bp兩種，據(jù)研究報道，ORF1編碼的Rep蛋白與病毒的復制有關(guān)，ORF2編碼的Cap蛋白是PCV2衣殼的主要成分，具有較好的免疫原性，因此對ORF2的研究已經(jīng)成為熱點。本試驗從福州郊區(qū)某大型豬場的病豬中采集病料，運用PCR方法對PCV2進行DNA檢測；并進而進行全基因序列的擴增和分子結(jié)構(gòu)特征的分析。 本分離株經(jīng)過測序得到，其基因組長度為1767bp，共

3、有11個開放閱讀框。其中ORF1有945個堿基，編碼314個氨基酸，存在3個糖基化位點(23～25aa(NPS)、256～258aa(NQT)、286～288aa(NAT))；ORF2的長度為705bp，編碼233個氨基酸，只有一個糖基化位點(143～145aa)。 對ORF1和ORF2編碼氨基酸的二級結(jié)構(gòu)預測中顯示：ORF1的H：α-螺旋，E：β-折疊，空格：其它或無規(guī)卷曲各占的比例為24.2％、20.38％、55.41％；O

4、RF2中相對應(yīng)的比例為6.41％、31.20％、62.39％。同時也預測了ORF2的親水性和抗原表位，結(jié)果表明ORF2表達的蛋白在N端的10左右顯示出高度親水性。其所編碼的氨基酸在3～18位、32～43位、84～87位、113～118位、176～181位、227～231位可能存在抗原表位。 用DNAstar分析比較了福州分離株與國內(nèi)外分離株之間的同源性，其結(jié)果顯示同源性為94.3％～99.8％。經(jīng)過與國內(nèi)外毒株的進化發(fā)育樹的繪制

5、可知，福州分離株和龍巖分離株及其他各株之間的親緣關(guān)系較遠，獨立在一個分支上，而全部的毒株在地域上沒有明顯的分布。 在對本分離株的兩個主要開放閱讀框(ORF1、ORF2)進行核苷酸序列以及推導的氨基酸序列分析時可得，福州分離株與加拿大代表株以及省內(nèi)3個毒株的ORF1核苷酸序列的同源性為97％～99.5％；氨基酸的同源性為97.8％～99％。ORF2核苷酸序列的同源性為91.3％～99.7％；氨基酸的同源性為92.3％～98.7％。