豬圓環(huán)病毒2型陜西株的分離鑒定及其ORF2基因的序列分析.pdf

1、豬圓環(huán)病毒2型感染是近些年新發(fā)現(xiàn)的豬的傳染病，主要包括斷奶豬多系統(tǒng)衰竭綜合征、懷孕母豬繁殖障礙、斷奶豬和育肥豬的呼吸道疾病、豬皮炎和腎炎綜合征、幼齡仔豬A<,2>型先天性震顫、間質(zhì)性肺炎(intersticial pneumonia，IP)、增生性壞死性肺炎(proliferative and neerotizing pneumonia，PNP)等。PCV2感染能降低豬體免疫力，常引起其他病原微生物的繼發(fā)或并發(fā)感染，加重病情。該病在世界

2、許多國(guó)家和地區(qū)的廣泛流行，已經(jīng)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重影響著世界養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展。我國(guó)自從2000年郎洪武首次報(bào)道檢測(cè)出PCV抗原以來，北京、浙江、四川、黑龍江等省也報(bào)道了有PCV2的感染，并分離到各地PCV2流行毒株。在陜西省也可見到很多臨床上疑似PCV2感染的病例，但目前僅有一篇關(guān)于PCV2感染的血清學(xué)調(diào)查報(bào)道，還未見有關(guān)PCV2的病原學(xué)和分子生物學(xué)方面的報(bào)道，因此本研究開展了陜西省PCV2的分離鑒定及其主要結(jié)構(gòu)蛋白的編碼基因ORF2

3、的克隆和序列分析等=工作。主要內(nèi)容及結(jié)果如下： 1.根據(jù)GenBank中已發(fā)表的豬圓環(huán)病毒(PCV1和PCV2)基因序列，設(shè)計(jì)并合成2對(duì)特異性引物，對(duì)8個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)內(nèi)124頭豬的病料進(jìn)行了PCV2檢測(cè)，檢測(cè)到了78份PCV2陽性病料，受檢豬組織樣品中PCV2 PCR檢測(cè)的陽性率為62.9％。結(jié)合臨床發(fā)病情況、PCR檢測(cè)結(jié)果及病理觀察，證實(shí)了陜西規(guī)?；i場(chǎng)普遍存在PCV2感染。 2.將PCR檢測(cè)為PCV2陽性的組織樣品處理

4、后接種到無PCV污染的PK-15細(xì)胞中傳代，盲傳6代后間接免疫熒光鑒定，在接毒細(xì)胞內(nèi)觀察到了特異性免疫熒光。同時(shí)進(jìn)行PCR鑒定，擴(kuò)增出了預(yù)期長(zhǎng)度的PCV2的DNA片段。由此證明，分離出的病毒是PCV2型。通過上述方法，本試驗(yàn)在陜西省共分離到5株P(guān)CV2。 3.根據(jù)GenBank中豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)的基因序列，設(shè)計(jì)1對(duì)PCV2的ORF2特異性引物，將本實(shí)驗(yàn)室分離的5株P(guān)CV2 ORF2基因克隆入pMDl8-T載體，篩選出陽

5、性重組質(zhì)粒pMD-T-ORF2進(jìn)行測(cè)序，并將測(cè)序結(jié)果與國(guó)內(nèi)外已發(fā)表的參考毒株進(jìn)行序列比對(duì)分析。結(jié)果表明，分離到的5株P(guān)CV2的ORF2基因大小相同，都為702 bp，編碼一條233個(gè)氨基酸組成的多肽；其核苷酸與參考毒株的同源性為90.5％～99.7％，氨基酸同源性為81.2％～97.4％；本研究分離的5個(gè)分離毒株親緣關(guān)系很近，同源性為98.3％～99.7％；5株陜西分離毒株與國(guó)內(nèi)其他省份的分離株的親緣關(guān)系較近，同源性為95.6％～99.