白眉蝮蛇蛇毒Gln49磷脂酶A-,2-體外凝血活性.pdf

1、采用陽離子交換層析和凝膠過濾層析，從長(zhǎng)白山白眉蝮蛇(Gloydius ussurensis)蛇毒中分離得到磷脂酶A<,2>的同源物，SDS-PAGE檢測(cè)為一條單帶，質(zhì)譜檢測(cè)分子量為13880.789；該蛋白49位氨基酸殘基為Gln，將其命名為Gln49-PLA<,2>。Gln49-PLA<,2>具有肌肉毒性，神經(jīng)毒性，但缺乏磷脂酶A<,2>活性。 Gln49-PLA<,2>對(duì)新鮮血漿和人纖維蛋白原的體外凝固作用結(jié)果表明：Gln4

2、9-PLA<,2>能夠劑量依賴性地誘導(dǎo)新鮮的人血漿及纖維蛋白原溶液凝固。在實(shí)驗(yàn)劑量下，凝固時(shí)間分別從139.5±4.56min降到12.87±0.12min，從180.67±1.86s降到19.00±0.58s；同時(shí)，隨著Gln49-PLA<,2>濃度的增大，血漿的復(fù)鈣時(shí)間也明顯縮短，從7.46±1.17min到0.75±0.33min。 通過Gln49-PLA<,2>對(duì)血漿凝血四項(xiàng)(凝血酶原時(shí)間PT，部分活化凝血酶時(shí)間APTT

3、，凝血酶時(shí)間TT和纖維蛋白原濃度Fib)的影響，結(jié)果表明：Gln49-PLA<,2>不影響Fib、TT；能夠使PT時(shí)間從12.4±0.29s縮短到6.95±0.20s；能夠使APTT從39.22±0.88s延長(zhǎng)到44.47±0.47s。Gln49-PLA<,2>不能激活凝血因子XⅢ，并且其凝血活性不受肝素和antithrombinⅢ抑制。Gln49-PLA<,2>具有精氨酸酯酶活力，以BAEE為底物所得的比活力為1747U/mg；且凝血

4、酶比活為1100NIH thrombin U/mg。以上結(jié)果表明Gln49-PLA<,2>是一種類凝血酶。 Gln49-PLA<,2>具有纖維蛋白原水解活性，優(yōu)先迅速水解纖維蛋白原Aα鏈，釋放纖維蛋白多肽A(FPA)。隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)(大于10小時(shí))，纖維蛋白原Bβ鏈也能被緩慢水解，釋放纖維蛋白多肽B(FPB)，且其水解活性及凝血活性受絲氨酸蛋白酶抑制劑PMSF(苯甲磺酰氟)的抑制，但是不受金屬蛋白酶抑制劑EDTA的抑制。由此