脂蛋白相關(guān)磷脂酶A-,2-（Lp-PLA-,2-）基因多態(tài)性與冠心病關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、背景 冠狀動脈粥樣硬化性心臟病是一種多基因疾病，遺傳因素在冠狀動脈粥樣斑塊病變的發(fā)展及其并發(fā)癥發(fā)生中也發(fā)揮著至關(guān)重要的作用，研究CAD的遺傳危險因素對于開展有針對性的人群預(yù)防，延緩或防止冠心病的發(fā)生發(fā)展具有重要的理論意義。 在動脈粥樣硬化的形成和發(fā)展過程中，氧化和炎癥扮演著重要角色。LDL中的磷脂被氧化脂質(zhì)(如脂肪酸)氧化，產(chǎn)生的過氧化物導(dǎo)致輕微修飾的LDL的產(chǎn)生，并啟動一系列步驟形成早期的脂紋。脂質(zhì)過氧化物的不斷形成和

2、聚集，最終將加速動脈粥樣硬化的發(fā)展。高密度脂蛋白作為脂蛋白中顆粒最小，密度最高的一種，被認(rèn)為具有抗動脈粥樣硬化的功能，除了是因為它具有促進(jìn)膽固醇逆轉(zhuǎn)運的作用外，還因為它具有抗氧化、抗炎的功能。HDL所含的幾種酶類參與了它的此項功能，脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2(Lipoproteln-associated phospholipase A2，Lp-PLA2)即是其中一種。 Lp-PLA2是磷脂酶A2超家族中的一種亞型，也被稱為血小板活化因

3、子乙酰水解酶(PAF-AH)。流行病學(xué)研究揭示，Lp-PLA2與冠心病發(fā)病風(fēng)險存在關(guān)聯(lián)，但并不清楚該現(xiàn)象是對動脈粥樣硬化炎癥刺激的一種應(yīng)答反應(yīng)還是導(dǎo)致動脈粥樣硬化的直接原因，或者是一種發(fā)病風(fēng)險標(biāo)識。一方面，Lp-PLA2可以水解血小板活化因子(PAF)和LDL氧化或氧化應(yīng)激導(dǎo)致產(chǎn)生的氧化脂質(zhì)產(chǎn)物，因此被認(rèn)為具有抗動脈粥樣硬化作用；但是另一方面，研究發(fā)現(xiàn)，Lp-PLA2還能水解氧化磷脂產(chǎn)生溶血磷脂酰膽堿(lyso-PC)和自由氧化脂肪酸，

4、而這些物質(zhì)均具有促動脈粥樣硬化的作用。 對Lp-PLA2基因多態(tài)性的研究發(fā)現(xiàn)，第9外顯子V279F位點和第11外顯子A379V位點的變異具有功能意義，這兩個位點的變異與冠心病存在關(guān)聯(lián)。關(guān)于Lp-PLA2基因多態(tài)性位點與冠心病的關(guān)系，在中國人群中尚未進(jìn)行過大樣本的研究。因此本研究主要關(guān)注Lp-PLA2基因V279F和A379V這兩個位點在中國漢族冠心病患者和健康對照人群中的基因多態(tài)性，以及它們與冠心病的發(fā)病及嚴(yán)重程度之間的關(guān)系。

5、 目的: 1.研究中國漢族人群冠心病患者和健康對照人群中Lp-PLA2V279F和A379V多態(tài)性位點的分布特點，比較冠心病患者和健康人群之間上述兩個位點基因型和基因頻率的差異； 2.分析在中國漢族人群中Lp-PLA2V279F和A379V兩個多態(tài)性位點與冠心病患者的傳統(tǒng)危險因素、脂類代謝情況、冠狀動脈病變特點以及冠心病嚴(yán)重程度之間的相關(guān)性，進(jìn)而揭示Lpr-PLA2在冠心病發(fā)病過程中發(fā)揮的作用。 方法:

6、 1.收集經(jīng)冠脈造影確診或有心梗病史的冠心病患者及同期體檢的健康對照。收集各研究對象的冠心病傳統(tǒng)危險因素相關(guān)信息，包括年齡、性別、吸煙史、家族史以及既往病史(高血壓、糖尿病或血脂異常等病史)；收集病情嚴(yán)重程度的評價指標(biāo)，包括心肌梗死病史、冠脈病變嚴(yán)重程度、肌鈣蛋白、腦鈉肽等； 2.經(jīng)靜脈采取空腹血樣，使用傳統(tǒng)酚抽提法從血細(xì)胞中提取DNA; 3.Taqman探針法對Lp-PLA2第9外顯子的V279F位點和第11外顯子

7、的A379V位點進(jìn)行分析，對上述兩個位點的基因型和等位基因在冠心病組和正常對照組的頻率進(jìn)行比較分析; 4.對上述基因位點多態(tài)性與臨床表型的相關(guān)性進(jìn)行分析。 結(jié)果: 1.研究共納入冠心病患者806例(年齡61.51±10.74歲，男：女比例為620:186)，健康對照者482例(年齡61.63±8.41歲，男：女比例為264:218)，兩組患者性別存在顯著差異(p<0.001)。對冠心病傳統(tǒng)危險因素的比較分析發(fā)現(xiàn)，

8、冠心病組BMI、高血壓患病率、FBG和HsCRP水平顯著高于正常對照組，而HDL-C、ApoA1顯著低于正常對照組。 2.Lp-PLA2 V279F位點的基因型與等位基因在兩組間的分布有顯著差異，冠心病組VF+FF基因型和F等位基因出現(xiàn)頻率顯著高于正常對照組(兩組VF+FF基因型的頻率分別為13.6％和9.3％，p=0.024；F等位基因的頻率分別為6.9％和4.9％，p=0.037)；而.A379V位點基因型和等位基因的頻率在

9、冠心病患者和正常對照之間無顯著差異。SHESIS單體型分析發(fā)現(xiàn)，兩位點形成的單體型中TC單體型與冠心病發(fā)病相關(guān)(0R=1.449，95％CI[1.019-2.061]，p=0.038)。 3.對多支病變患者與正常對照組的比較發(fā)現(xiàn)，多支病變患者中V279F位點的VF+FF基因型和F等位基因的出現(xiàn)頻率均顯著高于正常對照組，VF+FF基因型頻率為15.2％(p=0.005)；F等位基因頻率為7.7％(p=0.009)；同時也顯著高于單

10、支病變亞組(對應(yīng)p值分別為0.027和p=0.028)； 4.對單支冠脈狹窄≥70％的冠心病患者與正常對照組的比較發(fā)現(xiàn)，該群患者中VF+FF基因型和F等位基因的頻率也顯著高于正常對照組，冠脈中重度狹窄患者VF+FF基因型頻率為14.1％(p=0.013)，F(xiàn)等位基因頻率為7.1％(p=0.025)。 5.對冠心病患者中有心梗病史者和無心梗病史者的比較分析發(fā)現(xiàn)，心?；颊咧蠥379V位點的V379等位基因的出現(xiàn)頻率顯著高于無心梗病史

11、的冠心病患者(分別為18.7％和14.8％，p=0.038)，同時VW基因型的頻率也顯著高于無心梗病史患者(分別為3.3％和1.2％。p=0.043)。 6.對冠心病合并/未合并高血壓患者及冠心病合并/未合并糖尿病患者的亞組間比較均未發(fā)現(xiàn)V279F和A379V位點變異在上述兩亞組間存在顯著差異。 7.冠心病發(fā)病風(fēng)險分析提示V279F位點變異與冠心病發(fā)病相關(guān)(OR=1.525，95％CI[1.056-2.202]，p=0.

12、024)，經(jīng)校正性別、BMI和高血壓后仍顯示具有相關(guān)性(OR=1.611，95％CI[1.020，2.545]，P=0.041)。在冠心病患者中進(jìn)行的心梗發(fā)病風(fēng)險分析提示A379V位點變異與冠心病患者心梗發(fā)生相關(guān)，經(jīng)校正性別、BMI、吸煙、HsCRP、HDL-C和LDL-C后仍顯示具有相關(guān)性(OR=1.596，95％CI[1.104,2.306]，P=0.013)。 8.比較V279F和A379V位點各基因型個體的血脂水平發(fā)現(xiàn)，

13、冠心病組人群中A379V位點AV+VV基因型個體的LDL-C和ApoB水平顯著高于AA基因型個體(LDL-C平均值分別為2.63mmol/1和2.48mmol/l，p=0.030，ApoB平均值分別為0.88mol/1和0.81mmol/1，p=0.018)，但正常對照人群中未發(fā)現(xiàn)該差異。其余血脂指標(biāo)在兩組人群各基因型個體之間無顯著差異。 結(jié)論: 1.Lp-PEA2Y279F位點變異與冠心病相關(guān)，冠心病患者中VF+FF基

14、因型頻率顯著高于正常對照，F(xiàn)等位基因攜帶者冠心病發(fā)病風(fēng)險增加，冠脈病變程度更重。 2.Lp-PL2A379V位點與冠心病發(fā)病無明顯關(guān)聯(lián)，但該位點變異與冠心病患者中心梗發(fā)生相關(guān)，有心梗病史的冠心病患者中VV基因型和V379等位基因的出現(xiàn)頻率顯著高于無心梗病史的冠心病患者，AV+VV基因型患者心梗風(fēng)險增加。 3.Lp-PLA2A379V位點的AV+VV基因型個體的LDL-C和ApoB水平顯著高于AA基因型個體。 4.