馬兜鈴酸對(duì)人腎小管細(xì)胞分泌性磷脂酶A-,2-活性的作用研究.pdf

1、[目的] 1.單用或聯(lián)用馬兜鈴酸鈉鹽(aristolochicacidAA)和分泌性磷脂酶A2(secretoryphospholipaseA2sPLA2)激活劑(1ipopolysaccharideLPS脂多糖；CaCl2氯化鈣)刺激人近端腎小管上皮細(xì)胞株(humankidneycellHKC)，測定培養(yǎng)上清中sPLA2活性。 2．以MTT490nm處OD值、細(xì)胞周期和增殖細(xì)胞核抗原(proliferativecell

2、antigenPCNA)為指標(biāo)，觀察sPLA2激活劑能否減輕AA毒性。 [方法] L以體外培養(yǎng)的HKC為研究對(duì)象，實(shí)驗(yàn)分組如下：正常對(duì)照組、AA組、LPS組、CaCl2組、AA-~LPS組和AA+CaCl2組。 2．用sPLA2活性檢測試劑盒(sPLA2assaykit)檢測上清中sPLA2活性改變。 3．用MTT測定細(xì)胞活性、流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期改變，以及細(xì)胞免疫組化法檢測胞核PCNA表達(dá)，觀察不同實(shí)

3、驗(yàn)組細(xì)胞生長狀況的變化。 [結(jié)果] 1．10mg/LAA刺激HKC，上清中sPLA2活性略有下降，與正常對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。隨著AA濃度的增大，sPLA2活性升高(P<0．05)，與劑量呈顯著正相關(guān)(r=0．923，P<0．01)。40mg／LAA培養(yǎng)HKCl2h、48h和72h，上清中sPLA2活性與作用時(shí)間呈正相關(guān)(r=0．746，P<0．05)。 2．Pearson相關(guān)分析表明，AA劑量正相關(guān)地抑

4、制CaCl21200gmol幾(r=0．936，P0．05)，可輕度改善細(xì)胞受抑程度。 4．10mg／LAA明顯降低細(xì)胞密度，上調(diào)胞核PCNA表達(dá)(P<0．05)，

5、聯(lián)用600gmol幾CaCl2(P<0．05)或100ng／mlLPS(P>0．05)后，PCNA表達(dá)下降。 5．1mg／LAA作用48小時(shí)，可將HKC阻滯在s期(P<0．05)和G2／M期(P<0．05)，隨AA濃度增加，S期細(xì)胞越來越多，G2／M期細(xì)胞數(shù)下降。20mg／LAA培養(yǎng)細(xì)胞12h，將HKC阻滯在S期和G2／M期(P<0．05)，且隨著培養(yǎng)時(shí)間延長而加重。10mg／LAA聯(lián)用1.00ng／mlLPS后，促進(jìn)G2／M期

6、細(xì)胞進(jìn)入Go／Gl期(P<0．05)；聯(lián)用600pmol/LCaCl2，促進(jìn)S期細(xì)胞進(jìn)入G2／M期(P<0．05)。 [結(jié)論] 1.高濃度AA損傷細(xì)胞激活HKCsPLA2，與藥物濃度和作用時(shí)間呈正相關(guān)。 2．AA可抑制LPS和CaCl2激活的HKCsPLA2，與劑量呈正相關(guān)。 3．AA抑制細(xì)胞增殖，將細(xì)胞阻滯在S期和G2／M期，以前者為主，上調(diào)PCNA表達(dá)。 4．一定濃度的LPS和CaCl2可輕度