骨髓增殖性腫瘤的JAK2V617F,DNMT3A,NPM1和FLT3-ITD基因突變研究.pdf

1、背景：
　　骨髓增殖性腫瘤(MPN)是一種危害人類(lèi)健康的血液系統(tǒng)疾病。主要分為真性紅細(xì)胞增多癥(PV)，原發(fā)性血小板增多癥(ET)，骨髓纖維化(MF)及慢性粒細(xì)胞白血病(CML)。除慢性粒細(xì)胞白血病因BCR/ABL融合基因的發(fā)現(xiàn)，其病因、發(fā)病機(jī)制已相對(duì)明確外，其他BCR/ABL基因陰性的MPN的病因機(jī)制尚不甚明了。近年來(lái)，多個(gè)分子標(biāo)志物，如JAK2V617F，JAK2外顯子12，MPL515和TET2等相繼被發(fā)現(xiàn)，這些標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)

2、對(duì)于理解MPN的分子發(fā)病機(jī)制具有重要意義，也有助于對(duì)這類(lèi)疾病的患者進(jìn)行診斷和治療。但是，仍有相當(dāng)部分MPN患者存在診斷困難。有研究表明部分急性髓系白血病(AML)及骨髓增生異常綜合征(MDS)患者中存在DNMT3A，NPM1和FLT3-ITD基因突變，并且可作為獨(dú)立的判斷預(yù)后的指標(biāo)。近年來(lái)，有研究表明，DNMT3A，NPM1和FLT3-ITD三種基因突變?cè)趧?dòng)物模型中都有致骨髓增殖性疾病的作用。但到目前為止，MPN患者中DNMT3A，NP

3、M1和FLT3-ITD這三種基因的突變情況，其臨床意義及其與預(yù)后之間的關(guān)系還不完全清楚，并且這三種基因突變與JAK2V617F基因突變之間的關(guān)系也尚未明確，仍有待進(jìn)一步研究明確。
　　目的：
　　了解JAK2V617F，DNMT3A，NPM1和FLT3-ITD這四種基因突變?cè)贛PN患者中的發(fā)生率及分布情況，并研究四種基因突變之間的相互并存或排斥關(guān)系;探索JAK2V617F基因突變與疾病臨床特征及實(shí)驗(yàn)室檢查之間的相關(guān)性;最后進(jìn)

4、一步明確JAK2V617F, DNMT3A，NPM1和FLT3-ITD基因突變?cè)贛PN發(fā)生發(fā)展中的作用及機(jī)制。
　　方法：
　　選擇2011年2月至2012年12月在山東大學(xué)齊魯醫(yī)院血液科門(mén)診或病房確診的120例MPN患者和9例MDS/MPN患者作為研究對(duì)象，120例MPN患者中男56例，女64例，平均年齡為55歲。其中包括PV25例，ET55例，MF24例，MPN-u15例和慢性中性粒細(xì)胞白血病(CNL)1例。提取骨髓白細(xì)

5、胞的基因組DNA，用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)方法擴(kuò)增基因組DNA中DNMT3A基因第23號(hào)外顯子含R882位點(diǎn)的部分片段，NPM1基因第12號(hào)外顯子及FLT3第11號(hào)外顯子，然后送山東省農(nóng)科院測(cè)序中心進(jìn)行雙向測(cè)序分析。此外，用TaqMan MGB探針熒光定量PCR方法檢測(cè)本組患者中JAK2V617F基因突變的情況。收集本組患者的臨床與實(shí)驗(yàn)室資料，隨訪患者的療效及生存情況，并分組進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：
　　1.120例MP

6、N患者共檢出72例JAK2V617F突變，突變率為60％(72/120);其中PV19例，突變率76％(19/25)，ET33例，突變率60％(33/55)，MF9例，突變率37.5％(9/24)，MPN-u10例，突變率66.7％(10/15)。四組之間的發(fā)病率有顯著性差異并且在PV組患者中的發(fā)病率最高。另外，1例CNL患者也檢測(cè)到JAK2V617F突變，9例MDS/MPN患者中檢測(cè)到1例JAK2V617F突變，突變率為11.1％(1

7、/9)。
　　2.72例JAK2V617F突變患者的平均年齡高于野生型。在PV和ET患者中，JAK2V617F突變患者的平均年齡高于野生型，而在MF和MPN-u患者中，未觀察到此現(xiàn)象。在年齡小于60歲的MPN患者中，JAK2V617F突變率為46.9％(30/64)，明顯小于年齡大于60歲的MPN患者的JAK2V617F突變率75％(42/56)。JAK2V617F在男性和女性患者中的突變率分別為57.8％(37/64)和62.5

8、％(35/56)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，即JAK2V617F的突變與年齡無(wú)關(guān)。
　　3.JAK2V617F突變型患者的白細(xì)胞計(jì)數(shù)，紅細(xì)胞計(jì)數(shù)，血紅蛋白水平明顯高于野生型患者，而血小板計(jì)數(shù)在兩組之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4.120例MPN患者中，只有1例MF患者發(fā)生DNMT3A-R882突變，PV,ET和MPN-u患者都沒(méi)有發(fā)生DNMT3A-R882位點(diǎn)突變。DNMT3A-R882突變?cè)贛F中的發(fā)生率為4％(1/24)，在MP

9、N患者中的總發(fā)生率為1％(1/120)。9例MDS/MPN患者中有1例發(fā)生DNMT3A-R882突變，突變率為11.1％(1/9)。而FLT3-ITD和NPM1基因突變?cè)谖覀兯芯康?20例MPN患者和9例MDS/MPN患者中均未檢測(cè)到。
　　結(jié)論:
　　1.中國(guó)MPN患者中PV, ET和MF患者JAK2V617F突變率較高，其中在PV患者中突變率最高;且其突變與年齡存在相關(guān)性，年齡越大，突變率越高。而突變率與性別無(wú)關(guān)。在本

10、研究中，JAK2V617F突變陽(yáng)性組患者的外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)，紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅和蛋白水平要明顯高于野生型患者。
　　2.只有1個(gè)MF患者和1個(gè)MDS/MPN患者發(fā)生DNMT3A-R882基因突變，突變率較低。所有患者中均未發(fā)現(xiàn)FLT3-ITD及NPM1基因突變，提示這兩種基因突變可能未參與MPN的發(fā)生發(fā)展或作用極小。此外，要除外我們所研究的患者可能存在這三種基因其他位點(diǎn)的突變的可能性，需要更進(jìn)一步更全面的如全基因組測(cè)序等研究來(lái)證實(shí)。