骨髓增殖性腫瘤JAK2V617F、CALR及MPL基因檢測與并發(fā)血栓性疾病關系的研究.pdf

1、本文主要從以下幾部分進行論述：
　　第一部分 MPN患者JAK2V617F、CALR和MPL基因突變率及其臨床特征研究（基線研究）
　　目的：
　　檢測MPN患者JAK2V617F、CALR和MPL基因突變率并調(diào)查與血栓形成相關的臨床特征。
　　方法：
　　(1)研究對象共3組，病例組為2013年9月至2014年4月確診為MPN且沒有血栓并發(fā)癥的患者，共68例（病例組，n=68）;血栓組為同期確診為動脈或靜

2、脈血栓形成者，但無血液疾病，共65例（血栓組，n=65）;對照組為同期健康體檢者或血液內(nèi)科病情穩(wěn)定的非MPN患者，沒有血栓并發(fā)癥，共68例(對照組，n=68)。
　　(2)記錄所有受試者的年齡、性別、居住地、職業(yè)等一般資料及既往史、吸煙史、酗酒史等，采集所有研究對象的血壓值、空腹血糖值、血低密度脂蛋白濃度、高密度脂蛋白濃度、膽固醇濃度值、身體質(zhì)量指數(shù)等與血栓形成有關的危險因子及凝血常規(guī)和血常規(guī)等。
　　(3)用人JAK2V6

3、17F基因變異檢測試劑盒提取血細胞中的基因組DNA，采用LightCycler480熒光PCR基因擴增檢測儀進行PCR擴增，用ABI3730型基因分析儀測序，輸出結果。
　　結果：
　　(1)對三組研究對象進行JAK2V617F基因突變進行檢測，68例MPN患者有46例發(fā)生JAK2V617F基因突變，突變率為67.65％。其中ET患者24例，突變率為64.86％，PV患者19例，突變率為82.61％，IMF患者3例，突變率為

4、37.5％。68例對照組中JAK2V617F突變陽性為1例，突變率為1.47％。MPN患者組JAK2V617F突變率顯著高于對照組(P＜0.05)。65例血栓組中JAK2V617F突變陽性為8例，突變率為12.31％。MPN患者組JAK2V617F突變率顯著高于血栓組(P＜0.05)。血栓組JAK2V617F突變率顯著高于對照組(P＜0.05)。對三組研究對象進行CALR基因突變進行檢測。68例MPN患者有12例發(fā)生CALR基因突變，突

5、變率為17.65％，其中包括ET患者10例，PV患者0例，PMF患者2例。68例對照組中CALR突變陽性為0例。MPN患者組與對照組比較P＜0.05，差異有統(tǒng)計學意義。65例血栓組CALR突變陽性為0例。MPN患者組與血栓組比較P＜0.05，差異有統(tǒng)計學意義。
　　對三組研究對象進行MPL基因突變進行檢測。68例MPN患者有3例發(fā)生MPL基因突變，突變率為4.41％，其中包括ET患者2例，PV患者0例，IMF患者1例。68例對照組

6、中MPL突變陽性為0例。MPN患者組與對照組比較P＜0.05，差異有統(tǒng)計學意義。65例血栓組MPL突變陽性為0例。MPN患者組與血栓組比較P＜0.05，差異有統(tǒng)計學意義。
　　MPN患者中三種基因全陰性的7例，占10.29％，三種突變沒有同時出現(xiàn)。
　　(2)對病例組JAK2V617F陽性患者與JAK2V617F陰性患者間血栓風險因子的比較，JAK2V617F陽性MPN患者與JAK2V617F陰性MPN患者間的收縮壓、舒張壓

7、、空腹血糖值和血脂譜值等均無顯著性統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。對病例組CALR陽性患者與CALR陰性患者間血栓風險因子的比較，除了空腹血糖外，兩組患者間的收縮壓、舒張壓、LDL、HDL、BMI、膽固醇等血栓風險因子均無顯著性統(tǒng)計學差異。比較病例組MPL陽性患者與MPL陰性患者間血栓風險因子的比較，兩組患者間的空腹血糖、收縮壓、舒張壓、LDL、HDL、BMI、膽固醇等血栓風險因子均無顯著性統(tǒng)計學差異。
　　(3)病例組PT值[(16

8、.94±2.07)s]顯著高于對照組[(12.26±0.96)s](P＜0.05);病例組APTT值[(59.26±12.38)s]顯著高于對照組[(30.73±3.13)s]（P＜0.05）;病例組TT值[(16.58±1.75)s]顯著高于對照組[(12.53±1.07)s](P＜0.05);病例組FIB值[(3.02±0.58)g/L]顯著低于對照組[(3.36±0.49) g/L](P＜0.05)。病例組中JAK2V617F突變

9、陽性患者的PT為(17.87±1.56)s]顯著高于JAK2V617F突變陰性患者[(15.00±1.60)s(P＜0.05);JAK2V617F突變陽性患者的APTT[(64.22±10.82)s]顯著高于JAK2V617F突變陰性患者[(48.91±8.49)s(P＜0.05);JAK2V617F突變陽性患者的TT[(16.98±1.642)s]顯著高于JAK2V617F突變陰性患者[(15.78±1.72)s(P＜0.05)。病例

10、組中的CALR突變陰性患者與CARL突變陽性患者間的PT、APTT、TT、FIB均無顯著性統(tǒng)計學差異，且病例組中的MPL突變陰性患者與MPL突變陽性患者間的PT、APTT、TT、FIB均無顯著性統(tǒng)計學差異。
　　結論及意義：
　　MPN患者有顯著較高的JAK2V617F、CALR和MPL基因突變率;MPN患者中JAK2V617F基因突變陽性與陰性患者問的已知血栓形成風險因子無顯著差異;MPN患者中JAK2V617F基因突變陽

11、性患者凝血功能較陰性患者顯著異常。
　　第二部分 MPN患者2年內(nèi)血栓事件發(fā)生的隨訪及其機制研究
　　目的：
　　探討MPN患者JAK2V617F、CALR及MPL基因突變與血栓性疾病發(fā)生的相關性及其機制研究。
　　方法：
　　分離MPN組患者外周血單個核細胞，提取細胞質(zhì)總蛋白，免疫印跡法檢測pSTAT3蛋白表達，提取外周血單個核細胞mRNA，RQ-PCR檢測TNF-α mRNA、IL-6mRNA的表達。<

12、br>　　結果：
　　(1)追蹤患者2年發(fā)生血栓性疾病情況。68例MPN患者中有26例患者發(fā)生血栓，血栓發(fā)生率為38.24％。對照組有2例發(fā)生血栓，發(fā)生率為2.94％，病例組的血栓發(fā)生率顯著高于對照組(P＜0.05)。病例組JAK2V617F陽性患者中血栓患者為47.83％(22/46)，非血栓患者為52.17％(24/46);病例組JAK2V617F陰性患者中血栓患者為18.18％(4/22)，非血栓患者為81.82％(18/2

13、2)，JAK2V617F陽性MPN患者的血栓發(fā)生率顯著高于JAK2V617F陰性MPN患者(P=0.019)。CALR和MPL基因突變陽性MPN患者的血栓發(fā)生率均為0。
　　(2)病例組PT值[(17.04±2.15)s]顯著高于對照組[（12.18±0.88）s](P＜0.05);病例組APTT值[(58.15±12.49)s]顯著高于對照組[(30.87±3.00)s1（P＜0.05）;病例組TT值[(17.59±2.81)s

14、]顯著高于對照組[（12.47±1.04）s](P＜0.05);病例組FIB值[(3.05±0.56)g/L]顯著低于對照組[(3.33±0.44) g/L]（P＜0.05）。
　　(3)ET患者中血栓患者PLT值[（840.15±48.60）×109/L]，顯著高于ET患者中非血栓患者[（809.46±36.98）×109/L](P＜0.05)。病例組中血栓患者TT為(18.85±2.72)s顯著高于非血栓患者(16.81±2.

15、60)s(P＜0.05）。
　　(4)對病例組患者與對照組研究對象間血栓風險因子的比較:隨訪2年后，病例組患者與對照組間的收縮壓值(P＞0.05)、舒張壓值（P＞0.05）、空腹血糖值(P＞0.05)、血脂譜值(P＞0.05)均無顯著性統(tǒng)計學差異。
　　(5)對病例組血栓患者與非血栓患者間血栓風險因子的比較:隨訪2年后，病例組中血栓患者與非血栓患者間的收縮壓值(P＞0.05)、舒張壓值(P＞0.05)、空腹血糖值(P＞0.0

16、5)、血脂譜值(P＞0.05)均無顯著性統(tǒng)計學差異。
　　(6)MPN患者血栓并發(fā)癥與外周血單個核細胞中p-STAT3的表達間的關系:與JAK2V617F突變陰性的MPN患者相比，JAK2V617F突變陽性的患者中p-STAT3蛋白灰度值顯著較高(P＜0.05);與無血栓并發(fā)癥的MPN患者相比，發(fā)生血栓并發(fā)癥的MPN患者有顯著較高的p-STAT5蛋白表達灰度值(P＜0.05)。JAK2V617F突變陽性且并發(fā)血栓的MPN患者的p-

17、STAT3蛋白表達灰度值顯著較高(P＜0.05)。
　　(7)MPN患者血栓并發(fā)癥與外周血單個核細胞中IL-6mRNA的表達間的關系:與JAK2V617F突變陰性的MPN患者相比，JAK2V617F突變陽性的患者中IL-6mRNA相對值顯著較高(P＜0.05);與無血栓并發(fā)癥的MPN患者相比，發(fā)生血栓并發(fā)癥的MPN患者有顯著較高的IL-6 mRNA相對值(P＜0.05); JAK2V617F突變陽性且并發(fā)血栓的MPN患者的IL-6

18、 mRNA相對值顯著較高(P＜0.05)。
　　結論及意義：
　　MPN患者中JAK2V617F基因突變陽性患者易發(fā)血栓事件;JAK2V617F基因突變陽性是MPN患者發(fā)生血栓事件的原因;MPN患者JAK2V617F基因突變陽性可能通過某種信號轉導路徑影響致凝血常規(guī)檢測結果顯著異常，最終導致血栓事件發(fā)生;IL-6相關的、經(jīng)STAT3活化的JAK-STAT信號路徑可能是JAK2V617F突變陽性的MPN患者血栓并發(fā)癥的機制之一