MGB Taqman探針?lè)ǘ繖z測(cè)415例骨髓增殖性腫瘤患者JAK2 V617F突變負(fù)荷及其臨床相關(guān)性研究.pdf

1、背景：
　　骨髓增殖性腫瘤(myeloproliferative neoplasm，MPN)根據(jù)分子生物學(xué)特性分為BCR-ABL陽(yáng)性和BCR-ABL陰性兩類疾病。BCR-ABL陽(yáng)性MPN主要為慢性粒細(xì)胞白血病(chronic myeloid leukemia，CML)，經(jīng)典BCR-ABL陰性MPN主要包括真性紅細(xì)胞增多癥(polycythemia vera，PV)、原發(fā)性血小板增多癥(essentialthrombocythemi

2、a，ET)、原發(fā)性骨髓纖維化(primary myelofibrosis, PMF)等。JAK2 V617F突變?cè)贛PN的診斷及鑒別診斷中具有重要意義，自2005年至今，國(guó)內(nèi)外已有不少研究組對(duì)JAK2 V617F突變做了相關(guān)研究，但多數(shù)為定性研究，僅有少數(shù)研究組對(duì)其轉(zhuǎn)錄本水平、突變負(fù)荷、突變比例做過(guò)相關(guān)研究，但此類研究大都病種單一、樣本量偏少、定量方法敏感性不高，因而結(jié)果差別較大。
　　目的：
　　為了更好地揭示JAK2 V

3、617F突變的內(nèi)在機(jī)制及其與MPN患者實(shí)驗(yàn)室及臨床特征之間的關(guān)系，本研究對(duì)415例MPN患者，采用更加敏感的MGB(Minor groovebinder) Taqman雙熒光探針?lè)?，?duì)JAK2 V617F突變進(jìn)行定量檢測(cè)，試圖通過(guò)本研究為MPN的診斷分型、臨床治療、疾病進(jìn)展、相互轉(zhuǎn)化及預(yù)后判斷提供更多的幫助。
　　方法：
　　選取2011年9月至2014年5月山東大學(xué)齊魯醫(yī)院門(mén)診及住院MPN患者及查體正常個(gè)體(JAK2 V6

4、17F突變負(fù)荷為0％)作為研究對(duì)象，收集外周靜脈血或者骨髓液。分別裂解紅細(xì)胞、提取基因組DNA、PCR擴(kuò)增，50℃2分鐘，95℃10分鐘預(yù)變性;95℃15秒，62℃1分鐘，進(jìn)行45個(gè)PCR循環(huán)，在PCR循環(huán)第二步60℃時(shí)收集熒光信號(hào)。分別檢測(cè)病例組與對(duì)照組各病例中JAK2V617F突變發(fā)生情況，并根據(jù)公式計(jì)算出所有研究對(duì)象的突變負(fù)荷。然后，根據(jù)JAK2 V617F的突變負(fù)荷情況，再將BCR/ABL陰性的MPN分為JAK2 V617F高突

5、變組、低突變組和陰性組，比較各組間患者的臨床特征、實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)以及治療效果與JAK2 V617F突變負(fù)荷的關(guān)系。
　　結(jié)果：
　　415例MPN患者共檢出JAK2 V617F(+)患者236例(56.9％)，其中109例真性紅細(xì)胞增多癥(PV)檢出91例(83.5％)，143例原發(fā)性血小板增多癥(ET)檢出80例(55.9％)，74例原發(fā)性骨髓纖維化(PMF)檢出31例(41.9％)，51例MPN不能分類(MPN-U)檢出33

6、例(64.7％)，1例慢性中性粒細(xì)胞白血病(CNL)為純合突變，4例高嗜酸粒細(xì)胞增多癥(HES)和33例慢性粒細(xì)胞白血病(CML)未發(fā)現(xiàn)存在突變。236例JAK2 V617F(+)患者中12例為純合突變（其中PV、MPN-U各4例，PMF2例，ET、CNL各1例）。JAK2 V617F突變以低突變負(fù)荷（突變負(fù)荷＜50％）為主(68.8％)，突變負(fù)荷以PV組最大，PMF次之，ET最小。PV患者年齡、白細(xì)胞計(jì)數(shù)與突變負(fù)荷呈明顯正相關(guān)性;ET