靶向4-1BBL基因siRNA抑制HL-60細(xì)胞生長(zhǎng)的體外研究.pdf

1、目的：觀察4-1BBLsiRNA對(duì)HL-60細(xì)胞生長(zhǎng)誘導(dǎo)凋亡作用，以及細(xì)胞因子分泌的影響；對(duì)比觀察4-1BBL被干擾前后HL-60細(xì)胞培養(yǎng)上清液對(duì)淋巴細(xì)胞增殖、凋亡誘導(dǎo)作用的影響，進(jìn)一步揭示腫瘤的免疫逃逸機(jī)制。
　　方法：采用化學(xué)合成法人工合成靶向人4-1BBL基因的siRNA，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染HL-60細(xì)胞；半定量RT-PCR和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)干擾前后HL-60細(xì)胞4-1BBLmRNA和表面蛋白的表達(dá)水平；MTT法檢測(cè)4-1BBL

2、被干擾后對(duì)HL-60細(xì)胞增殖作用的影響；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)基因干擾后對(duì)HL-60細(xì)胞凋亡的影響；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)4-1BBL干擾前后HL-60細(xì)胞內(nèi)TGF-β表達(dá)水平；ELISA法檢測(cè)4-1BBL干擾前后HL-60細(xì)胞培養(yǎng)上清TGF-β、VEGF分泌水平。密度梯度離心法分離外周血單個(gè)核細(xì)胞，收集4-1BBL干擾后的HL-60細(xì)胞培養(yǎng)上清液與體外分離的人淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)， MTT法檢測(cè)機(jī)體淋巴細(xì)胞增殖水平；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)淋巴細(xì)胞凋亡比率的變化。<

3、br>　　結(jié)果：靶向4-1BBLsiRNA轉(zhuǎn)染HL-60后，4-1BBLmRNA和蛋白的表達(dá)水平明顯降低；細(xì)胞增殖被抑制，其抑制作用在轉(zhuǎn)染48 h最明顯，增生抑制率達(dá)到（22.14±2.3）％；細(xì)胞凋亡率增加，由（9.8±2.5）%上升到（32.5±5.1）%；4-BBLsiRNA能降低HL-60細(xì)胞分泌TGF-β，使TGF-β從（76.13±4.59）%下降到（65.57±5.15）%（P＜0.05)；ELISA結(jié)果顯示，4-1BBL

4、基因被干擾后，HL-60細(xì)胞培養(yǎng)上清中TGF-β和VEGF分泌水平明顯降低（P<0.05）。與干擾前相比，干擾后的HL-60細(xì)胞培養(yǎng)上清液對(duì)機(jī)體淋巴細(xì)胞的增殖抑制和誘導(dǎo)凋亡作用下降
　　結(jié)論：化學(xué)合成的siRNA在體外能成功抑制靶基因4-1BBL的表達(dá)、HL-60細(xì)胞的增殖和細(xì)胞因子TGF-β和VEGF的分泌，并有助于細(xì)胞趨向凋亡；HL-60細(xì)胞高表達(dá)的4-1BBL信號(hào)具有反向調(diào)節(jié)作用，它能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞自身增殖、抑制其凋亡并能促進(jìn)