A112對(duì)HL-60細(xì)胞和NB4細(xì)胞的抑制作用.pdf

1、研究目的：A112是他米巴羅汀的二甲氨基乙酯的酯化物，為治療急性早幼粒細(xì)胞白血病和其他類型白血病的侯選化合物。本研究的目的是通過與他米巴羅汀對(duì)比其對(duì)HL-60細(xì)胞和NB4細(xì)胞的抑制作用，評(píng)估其抗腫瘤的活性。
　　 方法：在體外試驗(yàn)中，用MTT試驗(yàn)用來評(píng)估體外試驗(yàn)中A112和他米巴羅汀對(duì)HL-60細(xì)胞的抑制率，采用Annexin-V/PI染色法分析細(xì)胞分別在A112和他米巴羅汀作用下的凋亡情況，用western印記分析法分析測(cè)定H

2、L-60細(xì)胞中凋亡蛋白(包括胱天蛋白酶3，9和PARP等)的水平變化。在體內(nèi)試驗(yàn)中，對(duì)HL-60荷瘤小鼠，通過尾靜脈注射A112三周，然后計(jì)算腫瘤重量減少的百分率，計(jì)算腫瘤生長抑制率，從而評(píng)判抑瘤效果。另外將HL-60異體移植瘤取出，進(jìn)行TUNEL染色和western印記分析法來分析胱天蛋白酶3，9和PARP等凋亡蛋白的表達(dá)水平。
　　 主要結(jié)果：通過MTT分析，A112能有效地抑制HL-60細(xì)胞的生長，并且發(fā)現(xiàn)A112的抑制作

3、用在同等條件下比他米巴羅汀的作用要明顯。通過流式細(xì)胞儀來分析Annexin-V陽性細(xì)胞和TUNEL染色的小鼠荷瘤HL-60細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)A112可顯著地誘發(fā)HL-60細(xì)胞凋亡。經(jīng)尾靜脈注射給藥A112三周后的荷瘤小鼠，腫瘤的生長受到抑制，這更證明了A112的抑瘤作用。而且在與他米巴羅汀對(duì)照后發(fā)現(xiàn)，A112對(duì)移植瘤的抑制作用強(qiáng)于他米巴羅汀。進(jìn)一步用western印記分析法研究凋亡蛋白，在體內(nèi)試驗(yàn)和體外試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，A112都可提高細(xì)胞中凋亡蛋白

4、(包括胱天蛋白酶3，9和PARP等)的表達(dá)。在裸鼠血漿中檢測(cè)兩藥的濃度時(shí)發(fā)現(xiàn)，A112持續(xù)釋放其水解產(chǎn)物他米巴羅汀，比注射他米巴羅汀能維持更長時(shí)間的有效高濃度。
　　 我們還研究了在兩藥作用下細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化，發(fā)現(xiàn)完成分化的NB4細(xì)胞數(shù)量增加，這提示A112抑制白血病細(xì)胞生長與其誘導(dǎo)分化作用有關(guān)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，通過免疫熒光測(cè)試，看到一種白細(xì)胞完全分化標(biāo)記物CD11水平增高。另外A112還可以誘導(dǎo)C/EBPβ和CDK抑制劑p21