厚樸酚抑制HL-60細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)凋亡的作用與分子機(jī)制研究.pdf

1、背景：厚樸酚（magnolol）是木蘭科植物厚樸(Magno liaoffic inalis)的有效成分,具有中樞神經(jīng)抑制、抗菌、抗炎、抗氧化及抑制血小板聚集等多方面的藥理作用。近年來(lái)的研究證實(shí)厚樸酚具有較好的體外抗腫瘤作用，可抑制包括甲狀腺癌細(xì)胞、人膀胱癌細(xì)胞、神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞、卵巢癌細(xì)胞、前列腺癌細(xì)胞等多種惡性腫瘤細(xì)胞，且其抗腫瘤效應(yīng)具有多靶點(diǎn)、多途徑的特點(diǎn)。但是厚樸酚對(duì)白血病細(xì)胞的抑制作用卻鮮有報(bào)道。惡性腫瘤通常有細(xì)胞周期和凋亡調(diào)節(jié)

2、異常，目前普遍認(rèn)為細(xì)胞通過(guò)增殖、分化和死亡共同調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)，其中任意一環(huán)節(jié)發(fā)生異常都會(huì)導(dǎo)致不可控的生長(zhǎng)或死亡。此研究以急性髓系白血病 HL-60細(xì)胞為研究對(duì)象，觀察了厚樸酚對(duì) HL-60細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期及凋亡的影響，并且初步探討其作用機(jī)制，為臨床應(yīng)用厚樸酚治療急性髓系白血病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。目的：本研究旨在觀察厚樸酚對(duì)人急性髓系白血病HL-60細(xì)胞增殖和凋亡的影響，并初步探討其作用機(jī)制。
　　方法：采用MTT法檢測(cè)不同濃度厚樸酚（5

3、、10、20、40、80和160μg/ml）作用于HL-60細(xì)胞24 h和48 h后的細(xì)胞增殖情況；在光學(xué)顯微鏡下觀察HL-60細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化；DAPI染色后在熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞核形態(tài)學(xué)變化； Annexin V/PI雙染后采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)HL-60細(xì)胞凋亡的改變；Western blot檢測(cè)凋亡相關(guān)基因caspase-8、caspase-9的蛋白表達(dá)和 caspase-3剪切片段的表達(dá)變化；分別采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-

4、PCR）檢測(cè)Bcl-2家族Bcl-2和Bax的mRNA水平變化。
　　結(jié)果：厚樸酚能明顯抑制HL-60細(xì)胞的增殖，并隨時(shí)間延長(zhǎng)及劑量增加，細(xì)胞增殖抑制率也呈明顯升高趨勢(shì)，P＜0.05； HL-60細(xì)胞經(jīng)厚樸酚處理后體積明顯變小、且有凋亡小體的產(chǎn)生，細(xì)胞核的固縮、碎裂，呈現(xiàn)典型的凋亡形態(tài)學(xué)改變；40μg/ml厚樸酚處理HL-60細(xì)胞24 h后細(xì)胞早期凋亡率為（11.7±2.4）％，與對(duì)照組（1.4±1.1）%相比，具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異