石蒜堿通過(guò)上調(diào)p21基因表達(dá)抑制HL-60細(xì)胞增殖的分子機(jī)制初步研究.pdf

1、白血病是當(dāng)前嚴(yán)重危害人類健康的惡性血液腫瘤，化療藥物仍是治療白血病的主要策略。石蒜堿(lycorine)是從我國(guó)廣泛分布的多年生草本植物石蒜鱗莖中分離出的一種化學(xué)單體，屬于異喹啉類 (isoquinoline)植物生物堿，具有明顯的抗白血病作用。我們以人急性早幼粒白血病細(xì)胞株HL-60作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象進(jìn)行石蒜堿抗白血病作用機(jī)制研究，在凋亡相關(guān)基因表達(dá)變化和細(xì)胞周期阻滯兩方面展開(kāi)探討。 第一章：石蒜堿對(duì)HL-60細(xì)胞凋亡及增殖相關(guān)基因

2、表達(dá)影響的基因芯片分析利用基因芯片可以全面的研究在石蒜堿作用下HL-60細(xì)胞凋亡或增殖相關(guān)基因表達(dá)的改變。我們用5.0μM濃度石蒜堿干預(yù)HL-60細(xì)胞，并設(shè)立對(duì)照組(0 μM)，24 h后提取總RNA進(jìn)行基因芯片分析。本實(shí)驗(yàn)顯示在基因芯片總共494個(gè)凋亡或增殖相關(guān)基因中，顯著差異表達(dá)的基因有91個(gè)，其中上調(diào)79個(gè)，下調(diào)12個(gè)。所改變的基因涉及細(xì)胞周期、凋亡、細(xì)胞骨架等多個(gè)方面，并發(fā)現(xiàn)p21、Caspase-7、DAPKl、TNF-α、C

3、yclin Gl等與細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期阻滯相關(guān)的重要基因表達(dá)差異達(dá)2倍以上。由此可見(jiàn)，石蒜堿能夠在轉(zhuǎn)錄水平明顯改變一些關(guān)鍵基因的表達(dá)，從而使細(xì)胞內(nèi)的網(wǎng)絡(luò)調(diào)控的平衡被打破，最終導(dǎo)致細(xì)胞走向凋亡。 第二章：石蒜堿抑制HL-60細(xì)胞增殖的作用機(jī)制的初步研究進(jìn)而利用RT-PCR對(duì)p21基因的芯片結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果顯示石蒜堿干預(yù)下p21基因轉(zhuǎn)錄水平明顯上調(diào)，與基因芯片結(jié)果一致。進(jìn)一步利用Western blot研究在石蒜堿干預(yù)下p21蛋白

4、表達(dá)變化，以及受p21蛋白調(diào)控的下游分子：Cdc2、Cdk2、Cyclin E三種蛋白的表達(dá)變化。設(shè)立4個(gè)組，石蒜堿干預(yù)濃度分別為0、1.25、2.5和5.0μM，24 h后回收細(xì)胞提取蛋白進(jìn)行Western blot分析。結(jié)果顯示，隨著藥物濃度的上升，p21蛋白表達(dá)量逐漸上調(diào)，Cdc2、Cdk2、Cyclin E三種蛋白表達(dá)量逐漸下調(diào)。可見(jiàn)，石蒜堿可以影響HL-60細(xì)胞的細(xì)胞周期調(diào)控通路，使p21蛋白表達(dá)上調(diào)，Cdk2、Cdc2、Cy