載體介導(dǎo)的RNAi技術(shù)對HL-60細胞hTERT基因表達的影響.pdf

1、目的：探討由載體介導(dǎo)的靶向hTERT基因的RNAi技術(shù)對白血病HL-60細胞hTERT基因表達以及細胞生長的影響。 方法：用已經(jīng)構(gòu)建好的表達針對hTERT基因siRNA的質(zhì)粒載體經(jīng)轉(zhuǎn)染試劑RNAi-Mate轉(zhuǎn)染HL-60細胞；以空質(zhì)粒、轉(zhuǎn)染試劑及空白組做對照，將轉(zhuǎn)染后24h、72h、120h的細胞分別運用RT-PCR檢測細胞hTERT基因 mRNA 的表達、Western-blot檢測細胞hTERT蛋白的表達、流式細胞儀檢測細胞

2、的凋亡情況、MTT檢測細胞的增殖活性。 結(jié)果：RT-PCR：轉(zhuǎn)染后24h、72h、120h，HL-60細胞hTERT基因mRNA相對表達水平分別為0.31±0.08、0.28±0.05、0.32±0.06，質(zhì)粒組、轉(zhuǎn)染試劑組、空白對照組分別為0.55±0.13、0.49±0.08、0.58±0.19，實驗組mRNA表達水平低于對照組(P<0.05)；其中72h實驗組mRNA表達水平最低；Western-blot：24h、72h、

3、120h實驗組蛋白相對表達水平分別為0.47±0.09、0.32±0.07、0.51±0.08，質(zhì)粒組、轉(zhuǎn)染試劑組、空白對照組分別為0.75±0.11、0.76±0.15、0.73±0.14，實驗組蛋白表達水平低于對照組(P<0.05)，72h實驗組蛋白質(zhì)表達水平最低；流式細胞術(shù)：24h、72h、120h實驗組、質(zhì)粒組、轉(zhuǎn)染試劑組、空白對照組凋亡率分別為(11.95±3.61)％、(14.61±2.97)％、(12.82±3.01)％、

4、(4.25±2.16)％、(5.09±1.97)％、(3.76±1.84)％。實驗組凋亡率明顯高于其他各組(P<0.05)，72h試驗組凋亡率最高；MTT：各組于轉(zhuǎn)染后24h、72h、120h測OD值，根據(jù)OD值做細胞生長曲線及計算抑制率表明，實驗組細胞增殖明顯低于其它各組，其中72h實驗組抑制效果最明顯。 結(jié)論：載體介導(dǎo)的靶向hTERT基因的RNAi技術(shù)能在體外抑制HL-60細胞hTERT基因的表達，并能誘導(dǎo)細胞的凋亡和抑制細