IgA腎病患者體液標(biāo)本中穿通支原體的分離鑒定.pdf

1、目的： 近年來(lái)的研究提示人類致病性支原體的感染與多種自身免疫病相關(guān)，并于2005年Suzuki報(bào)道了一例與肺炎支原體感染相關(guān)的急性IgA腎病。本研究為探討IgA腎病患者血液、尿液及咽拭子標(biāo)本中穿通支原體(Mycoplasmapenetrans，Mpe)的分離檢出率，分析Mpe感染和IgA腎病發(fā)生、發(fā)展相關(guān)性；各體液標(biāo)本中支原體分離的相關(guān)性；IgA腎病各主要病理分型穿通支原體檢出率的關(guān)系。為IgA腎病發(fā)生、發(fā)展的生物學(xué)因素研究提供

2、一種新的生物學(xué)依據(jù)，為IgA腎病的防治提供一種新的途徑。 方法： 1.分離培養(yǎng) 以2001年-2006年間就診于溫州醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院腎內(nèi)科，經(jīng)腎臟活檢確診為原發(fā)性IgA腎病病人，及對(duì)照組健康查體人群作為本次研究對(duì)象，合計(jì)90例。本實(shí)驗(yàn)52例為IgA腎病病人，其中26例患者的腎組織均經(jīng)電鏡觀察并進(jìn)行病理分型：38例為健康體檢人群。實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組的尿液與咽拭子標(biāo)本經(jīng)0.22μm孔徑濾菌器過(guò)濾后的接種于改良的加入去甲

3、腎上腺素的SP-4培養(yǎng)基、解脲脲原體培養(yǎng)基及人型支原體培養(yǎng)基中；兩組EDTA抗凝的血液標(biāo)本離心后取其血漿白細(xì)胞層接種于以上各種支原體培養(yǎng)基。本實(shí)驗(yàn)各血液標(biāo)本均做無(wú)菌培養(yǎng)，每次支原體培養(yǎng)均做陰、陽(yáng)對(duì)照管，以顏色變化來(lái)判斷為初代培養(yǎng)陽(yáng)性。 2.菌株鑒定 接種于加去甲腎上腺素的SP-4培養(yǎng)基中的血液、尿液及咽拭子標(biāo)本，置于37℃5％CO2培養(yǎng)箱中，逐日觀察；將產(chǎn)酸、變亮黃的可疑陽(yáng)性培養(yǎng)物轉(zhuǎn)種于支原體固體培養(yǎng)基，37℃5％CO2

4、培養(yǎng)，48小時(shí)后置光學(xué)顯微鏡的高倍鏡下觀察，見(jiàn)“油煎蛋”樣菌落，證明支原體生長(zhǎng)，同時(shí)注意與L型細(xì)菌的鑒別；隨后用生化反應(yīng)試驗(yàn)、套式PCR及核酸序列檢測(cè)等方法進(jìn)一步鑒定。 3.電鏡觀察 用2.5％戊二醛和1％鋨酸雙重固定陽(yáng)性純培養(yǎng)液和培養(yǎng)陽(yáng)性的血液標(biāo)本，后于電子顯微鏡中下觀察的所分離到的支原體形態(tài)。 4.臨床資料分析實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組血液、尿液及咽拭子中支原體陽(yáng)性率進(jìn)行比較分析：對(duì)部分已于電鏡下進(jìn)行病理分析的IgA腎病

5、者，結(jié)合臨床資料對(duì)各病理組各體液標(biāo)本中支原體檢出率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 5.統(tǒng)計(jì)方法 所有計(jì)數(shù)資料均采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件包X2檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析與處理，取P＜0.05。 結(jié)果： 1.分離鑒定結(jié)果 1)分離培養(yǎng)在15例(28.8％)患者血液與尿液或/和咽拭子中同時(shí)分離到穿通支原體，單獨(dú)血液、尿液、咽拭子標(biāo)本陽(yáng)性分別為l例(1.9％)、3例(5.8％)與10例(19.2％)。52例IgA腎病患者血液、

6、尿液及咽拭子中穿通支原體的分離檢出率分別為30.8％、21.2％與44.2％；與38例正常對(duì)照相血液、尿液及咽拭子檢出率0例、2例(5.3％)與7例(18.4％)相比較，差異均有顯著意義(P＜0.05)，且在正常對(duì)照組中無(wú)兩種以上標(biāo)本同時(shí)分離出穿通支原體。在52例實(shí)驗(yàn)組中血液合并咽拭子感染者(12例，23.1％)與血液合并尿液感染者(7例，13.5％)無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，但I(xiàn)gA腎病組咽拭子中Mpe的分離率卻顯著高于尿液中的分

7、離率(P＜0.05)，而對(duì)照組中咽拭子與尿液的Mpe分離率卻無(wú)差異(P＞0.05)。 2)nPCR結(jié)果培養(yǎng)陽(yáng)性菌株經(jīng)支原體套式PCR鑒定結(jié)果為穿通支原體。 3)核酸序列分析從IgA腎病患者血液中分離的Mpe具有穿通支原體HF-2株特征性16s-RNA序列片段。 2.電鏡觀察 支原體純培養(yǎng)物經(jīng)負(fù)染后可見(jiàn)典型三層膜結(jié)構(gòu)；患者血液標(biāo)本可檢到支原體，并見(jiàn)有棒槌狀凸起。 3.臨床分析 對(duì)26例在電鏡

8、下分型的IgA腎病患者體液標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，從局灶節(jié)段增生性IgA腎病患者血液標(biāo)本中穿通支原體檢出率為60％，輕微病變性IgA腎病患者中分離率20％；同時(shí)咽拭子中Mpe分離率為20％低于其它三組；并且輕微病變性IgA腎病患者尿液中Mpe分離率為0，但經(jīng)統(tǒng)計(jì)，四組病理分型各標(biāo)本穿通支原體的陽(yáng)性率之間無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。 結(jié)論： 1.穿通支原體在IgA腎病病人的血液、尿液及咽拭子標(biāo)本中檢出率均顯著高于正常體健