穿通支原體在宮頸癌和膀胱移行細(xì)胞癌患者血液和腫瘤組織中的分離檢出.pdf

1、目的： 1.宮頸癌患者的血液標(biāo)本和宮頸組織穿通支原體的分離與鑒定。 2.膀胱移行上皮細(xì)胞癌患者的血液標(biāo)本和膀胱組織穿通支原體的分離與鑒定。 3.電鏡下觀察MPe顆粒的存在以及細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變。 4.探討MPe分離率與腫瘤發(fā)生、浸潤、轉(zhuǎn)移的相關(guān)性。 方法： 1.研究對象 宮頸癌組：包括宮頸浸潤癌55例、宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變(CIN)37例及非癌對照組24例； 膀胱癌組：包括膀胱

2、移行上皮細(xì)胞癌患者55例及非癌對照組27例。 所有對象均取相應(yīng)部位組織和血液標(biāo)本。 2.分離培養(yǎng)與鑒定 標(biāo)本預(yù)處理后接種在改良的SP4、Uu、Mh等液體培養(yǎng)基進(jìn)行支原體分離培養(yǎng)。Uu、Mh液體培養(yǎng)基置37℃、5％CO2培養(yǎng)2d：改良SP4液體培養(yǎng)基置37℃、5％CO2培養(yǎng)4～30d，逐日觀察并記錄培養(yǎng)基顏色變化情況。若培養(yǎng)液顏色由紅變黃、澄清，則判為“可疑陽性”，培養(yǎng)30d仍不變色者，判培養(yǎng)陰性。改良SP4液體培

3、養(yǎng)基4～5d變黃的初代培養(yǎng)陽性者主要有MPe、Mf及Mp，生化反應(yīng)試驗(yàn)予以初篩排除Mp。MPe、Mf采用無錫市克隆遺傳技術(shù)研究所提供的支原體套式PCR試劑盒進(jìn)一步鑒別。并抽取典型陽性菌株產(chǎn)物DNA序列分析。 3.臨床資料分析 宮頸癌組：不同宮頸癌病理特征患者M(jìn)Pe的累計(jì)分離率比較。 膀胱癌組：不同膀胱癌病理特征患者M(jìn)Pe的累計(jì)分離率比較。 4.電鏡觀察MPePCR陽性患者的組織和血液標(biāo)本超薄切片，電鏡下觀

4、察MPe顆粒的存在以及細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變。 5.統(tǒng)計(jì)方法MPe分離率的比較采用SPSS11.5軟件中x2檢驗(yàn)和Fisher精確檢驗(yàn)。 結(jié)果： 1.宮頸癌組MPe分離培養(yǎng)結(jié)果 92例宮頸癌患者的血液標(biāo)本MPe分離率為30.4％(28/92)，24例非癌對照血液中MPe分離率為4.2％(1/24)。兩組血液中MPe分離率相比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=7.00，P＜0.01);92例患者宮頸組織中MPe分離率為

5、25.0％(23/92)，對照組織中分離率為4.2％(1/24)。兩組組織中MPe分離率相比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=5.03，P＜0.05)。 2.膀胱移行上皮細(xì)胞癌組MPe分離培養(yǎng)結(jié)果 55例膀胱移行上皮細(xì)胞癌患者血液標(biāo)本MPe分離率為34.6％(19/55)，27例非癌對照血液MPe分離率為11.1％(3/27)，兩組血液中MPe分離率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=3.94，P＜0.05)；55例患者組織中MPe

6、分離率為36.4％(20/55)，對照組分離率為11.1％(3/27)，兩組組織中MPe分離率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=4.54，P＜0.05)。 3.不同宮頸癌病理特征患者M(jìn)Pe的累計(jì)分離率比較 宮頸浸潤癌組MPe陽性檢出率(45.5％，25/55)和宮頸CIN組(24.0％，9/37)相比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=4.24，P＜0.05)。 4.不同膀胱癌病理特征患者M(jìn)Pe的累計(jì)分離率比較 病理

7、診斷按Ash系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)分級，不同分級膀胱移行上皮細(xì)胞癌患者M(jìn)Pe的累計(jì)分離率進(jìn)行比較，G1級與G2級組間(x2=0.15，P＞0.05)、G2級與≥G3級組間(x2=0.13，P＞0.05)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 按UICC-TNM標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分期，MPe的累計(jì)分離率非浸潤性膀胱癌患者組為33.0％(14/42)，浸潤性膀胱癌患者為69.0％(9/13)，MPe的累計(jì)分離率比較，兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=5.26，P＜0.05)

8、 5.核酸序列分析從宮頸鱗狀細(xì)胞癌和膀胱移行上皮細(xì)胞癌患者血液和腫瘤組織分離到MPe的16SrRNA序列與2002年Sasaki(HF-2株)報(bào)道相一致。 6.電鏡觀察結(jié)果MPe陽性的血液和腫瘤組織在電鏡下觀察穿通支原體形態(tài)電鏡下發(fā)現(xiàn)，MPe陽性的宮頸鱗狀細(xì)胞癌和膀胱移行上皮細(xì)胞癌患者的血液、組織中均有典型葫蘆狀、三層膜結(jié)構(gòu)的穿通支原體存在。 結(jié)論： 1.宮頸浸潤癌、宮頸CIN患者的組織、血液中MPe分離陽性率