胃癌患者血液和腫瘤組織穿通支原體的分離鑒定.pdf

1、目的：近年來國內外的有研究表明,穿通支原體(Mycoplasma penetran,Mpe)感染可能與腫瘤發(fā)生相關.本研究通過對胃癌患者的血液和腫瘤組織穿通支原體分離鑒定,分析Mpe感染和胃癌發(fā)生、發(fā)展相關性,為胃癌發(fā)生、發(fā)展的生物學因素研究提供一種新的生物學依據,為胃癌的早期診斷和防治提供一種新的途徑.并在實驗過程中篩選更適合Mpe體外生長的培養(yǎng)基,初步建立Mpe分離鑒定程序,為Mpe感染的實驗室診斷、預防、治療提供理論和實驗依據.

2、 方法：1.分離培養(yǎng)我們以2004年4月至2006年4月間就診于溫州醫(yī)學院附屬-醫(yī)胃腸外科確診為胃癌患者、對照組胃潰瘍患者和體檢人群作為本次研究對象,共138例,其中胃癌患者74例,胃潰瘍患者20例,體檢人群44例.取胃癌組織和胃潰瘍組織剪碎后經0.22 μm孔徑濾菌器過濾除菌后接種于改良的未加去甲腎上腺素(NOradrenaline,Ne)SP-4培養(yǎng)基、改良的加JNe的SP-4培養(yǎng)基、自制的未加Ne培養(yǎng)基、自制的加Ne液體培養(yǎng)

3、基進行對比培養(yǎng);患者和體檢人群的血液標本離心后取血清分別接種于以上4種培養(yǎng)基中.每次培養(yǎng)均做對照管,以顏色變化時間為初代培養(yǎng)陽性時間.同時利用商品化試劑對每份標本進行人型支原體和解脲支原體的檢測. 2.菌株鑒定經處理的血液標本、胃癌和胃潰瘍組織標本用4種培養(yǎng)基對比培養(yǎng),將產酸、變黃的可疑陽性培養(yǎng)物過濾、轉種于Mpe固體培養(yǎng)基,經培養(yǎng)3-4天后置光學顯微鏡下觀察菌落,見"油煎蛋"樣菌落,證實支原體牛長,注意與L型細菌相鑒別.進一步

4、應用?；磻囼灐⑻资絇CR和核酸序列測定等方法進行鑒定.并在電鏡下觀察胃癌組織和血液組織中的Mpe形態(tài). 3.電鏡觀察Mpe陽性的血液和腫瘤組織在電鏡下觀察穿通支原體形態(tài). 4.臨床資料分析對胃癌手術患者切除組織進行病理分析.結合臨床資料,對胃癌患者和對照組Mpe檢出陽性率進行比較,并在胃癌患者中以腫瘤組織分化高低、淋巴結轉移程度以及胃癌患者臨床分期各分組比較Mpe感染率. 結果： 1.分離培養(yǎng)結果(1

5、)從74份胃癌患者的血液標本分離到9株Mpe,陽性率12.16﹪(9/74);74份腫瘤組織標本中共計分離培養(yǎng)到21株Mpe,陽性率27.02﹪(20/74);20例胃潰瘍患者的潰瘍組織中分離培養(yǎng)到1株Mpe,陽性率5.00﹪(1/20);體檢人群血液中未分離到Mpe.胃癌患者與對照組的Mpe陽性率比較有顯著性差異(P<0.05). (2)核酸序列分析從胃癌患者血液和腫瘤組織分離到Mpe的16SrRNA序列與2002年Sasak

6、i(HF-2株)報道相一致. (3)分離培養(yǎng)的30株Mpe在改良未加NF的SP-4培養(yǎng)基為1號培養(yǎng)基、改良加NE的SP-4培養(yǎng)基為2號培養(yǎng)基、自制未加NE的培養(yǎng)基為3號培養(yǎng)基、自制加NE的培養(yǎng)基為4號培養(yǎng)基的甲均初代培養(yǎng)剛性時間分別6.87±1.47、5.07±1.32、7.20±1.48、5.63±1.15天.四種培養(yǎng)基的平均初代培養(yǎng)陽性時間比較:①1號培養(yǎng)基與2號培養(yǎng)基比較有顯著性差異(P<0.05);②3號培養(yǎng)基與4號培養(yǎng)

7、基比較有顯著性差異(P<0.05);③2號培養(yǎng)基與4號培養(yǎng)基比較無顯著性差異(P>0.05). 2.電鏡下觀察到胃癌患者血液和腫瘤組織典型的Mpe形態(tài). 3.臨床分析 (1)74例胃癌患者病理報告中低分化、低分化癌組織胃癌患者Mpe陽性率44.23﹪(23/52),高中分化、高分化癌組織患者Mpe檢出陽性率13.63﹪(3/22),兩者分離率比較有顯著性差異(X<'2>=6.349,P<0.05). (2

8、)74例胃癌患者中早期胃癌(Ⅰ-Ⅱ期)患者Mpe的陽性率16.67﹪(5/30),中晚期胃癌(Ⅲ- Ⅳ期)患者Mpe的陽性率47.72﹪(21/44),兩者分離率比較有顯著性差異(X<'2>=7.55 1,P<0.05). (3)74例胃癌患者病理報告淋巴結轉移(NO-N1)的患者中Mpe的陽性率20.59﹪(7/34),淋巴結轉移(N2-N3)的患者中Mpe陽性率47.50﹪(19/40),兩者分離率比較有顯著性差異(X<'2