牛支原體分離鑒定、藥敏試驗及耐喹諾酮類藥基因的檢測.pdf

1、本研究在從寧夏地區(qū)分離鑒定3株牛支原體的基礎(chǔ)上，結(jié)合實驗室已有資源，對牛支原體最適培養(yǎng)基進行了篩選、并對分離株進行了藥敏試驗和耐藥基因的檢測，為我國牛支原體病滅活疫苗研究和藥物防治技術(shù)研究提供了理論依據(jù)，研究內(nèi)容有：
　　 1.從寧夏固原某牛場犢牛肺炎病例中分離鑒定到3株支原體，經(jīng)分離培養(yǎng)、形態(tài)觀察、生化試驗、PCR鑒定、16S rRNA基因序列分析及犢?；貧w試驗，鑒定為牛支原體，表明牛支原體已在寧夏地區(qū)出現(xiàn)。
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2、.比較了牛支原體在改良Thiaucourt's培養(yǎng)基、牛心湯培養(yǎng)基和改良KM2培養(yǎng)基中生長曲線，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，牛支原體在改良Thiaucourt's培養(yǎng)基中的生長30 h即可達到平臺期，平均最高生長滴度達7.0×109 ccu/ml，表明牛支原體在改良Thiaucourt's培養(yǎng)基中生長快、滴度高，為下一步牛支原體滅活疫苗研究提供了參考依據(jù)。
　　 3.選用了臨床常用的幾種抗菌藥物對8株牛支原體分離株進行藥敏試驗，結(jié)果表明，8株牛支

3、原體對泰樂菌素、延胡索酸泰妙菌素和替米考星有很高的敏感性(MIC值分別是3.33μg/ml、0.33μg/ml及2.67μg/ml)，對四環(huán)素和紅霉素中度敏感(MIC值分別是0.83μg/ml及10.7μg/ml)，對林可霉素、氟苯尼考和氟喹諾酮類藥物呈現(xiàn)不同程度的耐藥性(MIC值分別是0.33μg/ml、3.33μg/ml及0.33μg/ml)。結(jié)果為指導(dǎo)臨床用藥治療牛支原體感染提供了實驗數(shù)據(jù)支持。
　　 4.對牛支原體分離株

4、喹諾酮抗性基因進行了序列分析，包括DNA回旋酶編碼基因gyrA、gyrB和拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅳ編碼基因parC、parE。結(jié)果顯示，在gyrA的QRDR共有1處氨基酸發(fā)生改變，在gyrB的QRDR共有6處氨基酸發(fā)生改變，耐FQs牛支原體分離株parC基因中只發(fā)現(xiàn)1處突變致FQs耐藥決定區(qū)氨基酸改變，parE基因中只發(fā)現(xiàn)2處突氨基酸改變。本研究中臨床分離牛支原體對8種FQs呈現(xiàn)不同的耐藥程度，而且gyrA、gyrB、parC和parE的QRDR均

5、發(fā)生了氨基酸殘基的改變，說明牛支原體對FQs產(chǎn)生耐藥性的分子機制可能是FQs的作用靶位發(fā)生改變所致。
　　 研究結(jié)果表明：通過分離鑒定將三株菌體初步確定為支原體。經(jīng)過PCR擴增、16SrRNA基因序列分析以及動物回歸試驗，確定為牛支原體；牛支原體在改良Thiaucourt's培養(yǎng)基中生長快、滴度高；牛支原體的延胡索酸泰妙菌素、土霉素類藥物對于試驗菌株都有很好的療效；牛支原體對FQs產(chǎn)生耐藥性的分子機制可能是FQs的作用靶位發(fā)生改