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1、為了研究銅綠假單胞菌gyrA基因及parC基因突變與其對氟諾酮類藥物耐藥的關(guān)系.該課題采用瓊脂二倍釋法測定臨床分離的55株銅綠假單胞菌MIC值,從中篩選出1株敏感和8株耐藥菌,以標(biāo)準(zhǔn)敏感菌株ATCC27853作為質(zhì)控菌株.用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴增gyrA基因及parC基因的喹諾酮耐藥決定區(qū)(QRDR),擴增產(chǎn)物片段長度分別為351bp、397bp.用限制性內(nèi)切酶SacⅡ消化gyrA PCR產(chǎn)物,同時對上述10株菌的gyrA基因及pa
2、rC基因的喹諾酮決定區(qū)(QRDR)進行PCR-DNA直接測序分析.臨床分離銅綠假單胞菌parC基因QRDR序列分析發(fā)現(xiàn):R25、R42、R43、R44等4株耐藥菌株在87位有TCG→TTG突變,該引起氨基酸Ser→Leu的改變.此4株菌均有g(shù)yrA基因突變的存在,未發(fā)現(xiàn)parC基因突變單獨存在.同時具有g(shù)yrA基因及parC基因突變的菌株中,除R25外,R42、R43、R44的MIC值是單獨具有g(shù)yrA突變菌株MIC值的2~16倍.與此
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