免疫缺陷大鼠發(fā)酵支原體和梨支原體感染的藥物療效觀察.pdf

1、目的：
　　 本研究通過(guò)建立免疫缺陷大鼠發(fā)酵支原體(Mf)和梨支原體(Mpi)感染模型,使用紅霉素和左氧氟沙星進(jìn)行治療,觀察并比較其治療效果,從而明確上述二種藥物對(duì)免疫缺陷大鼠發(fā)酵支原體和梨支原體感染的療效。
　　 方法：
　　 1.培養(yǎng)基改良的SP4.培養(yǎng)基。
　　 2.標(biāo)準(zhǔn)菌株來(lái)源已知標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照菌株Mf(ATCC19989即PG-18)、Mpi(ATCC25960)由東南大學(xué)醫(yī)學(xué)院流行病學(xué)教研室提供。<

2、br>　　 3.菌液的制備將保存于-20℃的凍干菌株接種2ml改良SP4培養(yǎng)基中,置于37℃,5％CO2孵箱中復(fù)蘇,待菌株至最佳生長(zhǎng)期,取0.2ml菌液接種于1.8mlSP4培養(yǎng)基中,以此方法傳3代,待支原體生長(zhǎng)期至對(duì)數(shù)期收集離心后的沉淀物,并每次進(jìn)行菌落計(jì)數(shù),備用。
　　 4.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組
　　 4.1 免疫缺陷大鼠模型的制備60只清潔級(jí)SD大鼠,隔日腹腔注射環(huán)磷酰胺50mg/kg/d,共3次,制備免疫缺陷大鼠。<

3、br>　　 4.2 實(shí)驗(yàn)組將上述免疫缺陷大鼠隨機(jī)分為6組(n=10),組1和組2分別為Mf、Mpi感染組,組3和組4分別為Mf、Mpi感染紅霉素治療組,組5和組6分別為Mf、Mpi感染左氧氟沙星治療組。各組大鼠均腹腔注射相應(yīng)支原體,同時(shí),各治療組大鼠分別肌肉注射紅霉素或左氧氟沙星進(jìn)行治療。
　　 4.3 對(duì)照組準(zhǔn)備14只正常大鼠為對(duì)照,隨機(jī)分為2組(n=7),組7為正常大鼠Mf感染對(duì)照組,組8為生理鹽水對(duì)照組。組7大鼠腹腔注射

4、Mf,組8大鼠腹腔注射生理鹽水。
　　 5.各組大鼠觀察及死亡率比較觀察各組存活大鼠只數(shù),比較死亡率是否有顯著性差異。
　　 6.大鼠血液培養(yǎng)以及支原體的再培養(yǎng)各組大鼠均進(jìn)行血液普通培養(yǎng)以排除其他細(xì)菌感染。另外,各組大鼠死亡均進(jìn)行血液及其器官組織(心、肝、肺、腦、腎)的支原體再培養(yǎng)。
　　 7.血清細(xì)胞因子檢測(cè)大鼠臨死前心臟無(wú)菌采血,治療組與對(duì)照組存活大鼠同樣心臟無(wú)菌采血。分離血清,采用ELISA法檢測(cè)大鼠血清T

5、NF-α、IL-1β、IL-6和IL-10,比較組間差異。
　　 8.電鏡標(biāo)本的制作與觀察:分別取死亡組大鼠的心、肝、肺、腎和腦等重要臟器組織經(jīng)2.5％戊二醛和1％鋨酸雙重固定,丙酮梯度脫水,Epon-812環(huán)氧樹脂包埋,RMC-PT超薄切片機(jī)切片,半薄切片光鏡定位于組織實(shí)質(zhì)細(xì)胞部分,超薄切片經(jīng)鉛-鈾雙重染色,H-7500透射電鏡下觀察,拍片。存活大鼠處死后亦取上述臟器以相同方法制作標(biāo)本觀察。
　　 9.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:采用

6、SPSS13.0軟件對(duì)測(cè)得數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析和Fisher確切概率法進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。
　　 結(jié)果：
　　 1.感染組與藥物治療組的死亡率比較:經(jīng)確切概率比較,與Mf、Mpi感染組相比,Mf、Mpi感染紅霉素治療組的死亡率顯著降低(P<0.01)；與Mf、Mpi感染組相比,Mf、Mpi感染左氧氟沙星治療組的死亡率顯著降低(P<0.01)；而兩種藥物治療組進(jìn)行相應(yīng)比較,死亡率無(wú)顯著性差異(P>0.05)。
　　 2

7、.各組大鼠重要臟器的超微結(jié)構(gòu)觀察:電鏡下觀察,見Mf、Mpi感染組大鼠各臟器損傷嚴(yán)重,表現(xiàn)為心肌纖維不同程度溶解；肝臟炎性反應(yīng)明顯,肝細(xì)胞線粒體結(jié)構(gòu)破壞,肺泡空泡樣改變,細(xì)胞的脫落、炎性細(xì)胞浸潤(rùn),腎小管上皮細(xì)胞破壞、核固縮,腦組織嚴(yán)重水腫,腦細(xì)胞空泡樣改變；而各治療組大鼠的組織結(jié)構(gòu)明顯改善；正常大鼠Mf感染對(duì)照組動(dòng)物器官超微結(jié)構(gòu)病變較輕；生理鹽水對(duì)照組大鼠各臟器結(jié)構(gòu)正常。
　　 3.感染組大鼠和治療組及對(duì)照組大鼠的細(xì)胞因子檢測(cè)結(jié)

8、果比較:Mf、Mpi感染組大鼠血清TNF-α、L-1β、IL-6的含量明顯低于正常大鼠Mf感染對(duì)照組,而IL-10的含量明顯高于正常大鼠Mf感染組。與各自藥物治療組相比,Mf、Mpi感染組大鼠血清TNF-α、L-1β、IL-6的含量明無(wú)明顯差異,而IL-10的含量明顯升高。
　　 4.大鼠血培養(yǎng)及支原體再培養(yǎng)結(jié)果:動(dòng)物實(shí)驗(yàn)后,各組死亡大鼠的血液及臟器組織支原體再培養(yǎng),可見相應(yīng)支原體菌落生長(zhǎng),而普通血培養(yǎng)未發(fā)現(xiàn)其它細(xì)菌生長(zhǎng)。存活大

9、鼠的血液及臟器組織的支原體培養(yǎng)結(jié)果為陰性。
　　 結(jié)論：
　　 1.發(fā)酵支原體和梨支原體感染免疫缺陷大鼠能引發(fā)全身性感染,造成大鼠多臟器功能損傷,有著極高的死亡率。
　　 2.紅霉素和左氧氟沙星可顯著降低免疫缺陷大鼠發(fā)酵支原體或梨支原體感染的死亡率,減輕重要臟器損傷,治療效果滿意,可作為臨床治療免疫缺陷個(gè)體發(fā)酵支原體或梨支原體感染的選擇藥物。但紅霉素與左氧氟沙星相比,二者療效并無(wú)顯著差異。
　　 3.抗炎