阿奇霉素和克林霉素對(duì)發(fā)酵支原體和梨支原體致死性感染保護(hù)作用實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　 制備阿奇霉素和克林霉素免疫缺陷大鼠發(fā)酵支原體(Mycoplasma fermentans,Mf)梨支原體(Mycoplasma pirum,Mpi)致死性感染保護(hù)模型,探討抗生素對(duì)免疫缺陷大鼠Mf和Mpi致死性感染的保護(hù)的作用。試圖為HIV免疫缺陷患者M(jìn)f和Mpi的致死性感染的治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：
　　 用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的Mf、Mpi經(jīng)腹腔分別感染免疫缺陷大鼠和非免疫缺陷大鼠,保護(hù)組肌肉注射

2、阿奇霉素和克林霉素。計(jì)算致死率,觀察心、肺、腎和腦等重要器官超微結(jié)構(gòu)改變以及比較大鼠血清細(xì)胞因子變化。
　　 1.培養(yǎng)基
　　 改良的SP4(用于Mpi、Mf等支原體的分離培養(yǎng))液體和固體培養(yǎng)基。
　　 2.標(biāo)準(zhǔn)菌株來(lái)源
　　 已知標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照菌株Mf、Mpi和分別由東南大學(xué)醫(yī)學(xué)院流行病學(xué)教研室趙季文教授惠贈(zèng)。
　　 3.抗菌藥物準(zhǔn)備:抗菌藥物稀釋參照文獻(xiàn)[43,44]鍆操作。菌株最小殺菌濃度(MBC

3、s)和最小抑菌濃度(MICs)測(cè)定:MBCs(Minimal bactericidal concentration)測(cè)定采用試管法,MICs(Minimal inhibitory concentrations),采用平板法,參照文獻(xiàn)[6,7]操作進(jìn)行。
　　 4.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組
　　 4.1免疫缺陷大鼠模型的制備:隔日腹腔注射環(huán)磷酰胺,3次制成免疫缺陷模型。
　　 4.2實(shí)驗(yàn)組
　　 免疫缺陷大鼠隨機(jī)分為

4、4組。分別為Mf(阿奇霉素)、Mpi(阿奇霉素)、Mf(克林霉素)、Mpi(克林霉素),腹腔注射對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的支原體菌液,同時(shí)肌肉注射相應(yīng)抗生素。
　　 4.3對(duì)照組
　　 免疫缺陷和正常大鼠分5組,分為NS正常大鼠組、Mf感染正常大鼠組、Mpi感染正常大鼠組、Mf感染免疫缺陷大鼠組、Mpi感染免疫缺陷大鼠組,腹腔注射等劑量NS和Mf或Mpi菌液。
　　 5.大鼠培養(yǎng)以及支原體的再培養(yǎng)
　　 各組死亡大鼠均

5、進(jìn)行血液及其器官組織的支原體再培養(yǎng)以及普通培養(yǎng)以排除血液其他細(xì)菌的感染。
　　 6.各組大鼠觀察及致死率比較
　　 7.血清細(xì)胞因子檢測(cè)
　　 各組心臟無(wú)菌采血分離血清,采用ELISA法檢測(cè)大鼠血清IL-10、TNF-α、IL-1β和IL-6,比較組間差異。
　　 8.電鏡標(biāo)本的制作與觀察
　　 分別取死亡組大鼠的心、肺、腎和腦等重要臟器組織經(jīng)2.5％戊二醛和1％鋨酸雙重固定,丙酮梯度脫水,Epo

6、n-812環(huán)氧樹脂包埋,RMC-PT超薄切片機(jī)切片,半薄切片光鏡定位于組織實(shí)質(zhì)細(xì)胞部分,超薄切片經(jīng)鉛-鈾雙重染色,H-7500透射電鏡下觀察,拍片。
　　 9.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　 采用SPSS13.0軟件對(duì)測(cè)量數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析和Fisher確切概率法進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。
　　 結(jié)果：
　　 1.大鼠血培養(yǎng)及支原體再培養(yǎng)結(jié)果
　　 大鼠血清普通培養(yǎng)未見(jiàn)其它細(xì)菌污染,支原體再培養(yǎng)中支原體感染組大鼠都各自

7、分離到相應(yīng)的支原體,NS組大鼠均未分離到上述支原體。
　　 2.大鼠感染致死結(jié)果
　　 免疫缺陷Mf或Mpi攻擊組較非免疫缺陷M喊Mpi攻擊組死亡率顯著升高,差異顯著(P<0.01)；阿奇霉素和克林霉素保護(hù)實(shí)驗(yàn)組大鼠存活率與相應(yīng)Mf或Mpi攻擊組對(duì)照組比較有顯著性差異(P<0.01)；阿奇霉素與克林霉素保護(hù)實(shí)驗(yàn)組大鼠存活率比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)。
　　 3.血清細(xì)胞因子檢測(cè)比較
　　 (1)抗生

8、素(阿奇霉素、克林霉素)保護(hù)組大鼠血清TNF-α、L-1β和IL-6的含量明顯低于支原體感染組(免疫缺陷與非免疫缺陷)大鼠組(P<0.01),而IL-10的含量明顯高于非免疫缺陷支原體感染組大鼠組(P<0.01)。
　　 (2)支原體(Mf、Mpi)感染免疫缺陷組大鼠血清TNF-α、IL-1β和IL-6含量均明顯低于支原體(Mf、Mpi)感染非免疫缺陷大鼠組(P<0.01),IL-10的含量明顯高于支原體(Mf、Mpi)感染非免

9、疫缺陷大鼠組(P<0.01)。
　　 (3)支原體感染組(免疫抑制與非免疫抑制)大鼠血清TNF-α、IL-1β和IL-6的含量均明顯高于NS正常組(P<0.01),而IL-10的含量明顯低于NS正常組(P<0.01)。
　　 (4)抗生素(阿奇霉素、克林霉素)保護(hù)組大鼠血清TNF-α、L-1β、IL-6和IL-10的含量與NS正常組大鼠無(wú)明顯差別(P>0.05)。
　　 (5)阿奇霉素與克林霉素保護(hù)組大鼠血清TN

10、F-α、L-1β、IL-6和IL-10的含量無(wú)明顯差別(P>0.05)。
　　 4.心、肺、腎和腦超微結(jié)構(gòu)的改變
　　 支原體感染免疫缺陷組大鼠死亡后各臟器都出現(xiàn)相應(yīng)的病理改變,呈現(xiàn)多種器官的嚴(yán)重?fù)p害,表現(xiàn)為心肌纖維不同程度溶解,肺泡空泡樣改變,細(xì)胞的脫落、炎性細(xì)胞浸潤(rùn),腎小管上皮細(xì)胞破壞、核固縮等；而抗生素保護(hù)大鼠組器官超微結(jié)構(gòu)病變與感染組比較明顯減輕。
　　 結(jié)論：
　　 1.阿奇霉素與克林霉素能顯著