山羊支原體山羊肺炎亞種的分離鑒定及膜蛋白抗體間接血凝檢測(cè)方法的建立.pdf

1、山羊支原體山羊肺炎亞種屬于“絲狀支原體簇”的六成員之一，是典型山羊傳染性胸膜肺炎的唯一病原。1976年Macowan和Minette于肯尼亞首次從發(fā)病山羊體內(nèi)分離到該病原并驗(yàn)證了其致病性。山羊傳染性胸膜肺炎是山羊特有的急性或慢性高度接觸性傳染病,以呈現(xiàn)纖維素性肺炎和胸膜炎為特征,在非洲、亞洲等數(shù)十個(gè)國(guó)家和地區(qū)都有流行，對(duì)山羊養(yǎng)殖業(yè)的帶來(lái)了較為嚴(yán)重的損失，被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織列為法定傳染病之一，但由于其病原營(yíng)養(yǎng)要求苛刻，分離培養(yǎng)困難等因素，

2、目前只有14個(gè)國(guó)家分離到該病原。我國(guó)對(duì)山羊傳染性胸膜肺炎的報(bào)道始于上世紀(jì)20年代，但迄今為止僅辛九慶等于2007年從山東分離到一株山羊支原體山羊肺炎亞種。
　　本實(shí)驗(yàn)從內(nèi)蒙古地區(qū)某養(yǎng)殖場(chǎng)采集癥狀典型發(fā)病羊病料108份，無(wú)菌剪碎、研磨組織并接種到支原體選擇性培養(yǎng)基中，通過(guò)對(duì)液體培養(yǎng)基顏色和固體菌落的觀察選擇疑似山羊傳染性胸膜肺炎病原，并反復(fù)傳代純化病原。將分離到的山羊傳染性胸膜肺炎疑似病原通過(guò)染色鏡檢、生化鑒定、血清學(xué)等方法進(jìn)行初步

3、鑒定。然后將符合山羊肺炎支原體山羊亞種的菌株，參照已知的絲狀支原體16SrRNA的序列設(shè)計(jì)一對(duì)可擴(kuò)增1500bp片段的通用引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，將電泳條帶膠回收后測(cè)序。最后參照已知山羊支原體山羊肺炎亞種特異arcD基因設(shè)計(jì)的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，以此來(lái)區(qū)分絲狀支原體簇的不同株。測(cè)序結(jié)果顯示所測(cè)序列與絲狀支原體簇的同源性在89.1％~99.1%不等。該結(jié)果確定了所得病原為絲狀支原體簇的某一成員。而用ArcD基因設(shè)計(jì)的特異引物，經(jīng)PCR檢測(cè)到3