豬流產(chǎn)嗜性衣原體病間接ELISA抗體檢測方法的建立.pdf

1、流產(chǎn)嗜性衣原體（Chlamydophila abortus，CAB）是引起豬、牛、羊等多種動物流產(chǎn)、死胎、弱胎等慢性接觸性疾病的一種重要病原體，孕婦也可感染而發(fā)生流產(chǎn)。集約化豬場的CAB感染必須引起重視。建立準(zhǔn)確、快速的診斷方法是預(yù)防和控制本病的重要措施。本研究根據(jù)Genbank上公布的多型性外膜蛋白90（pomp90）基因序列設(shè)計引物，應(yīng)用PCR技術(shù)獲得CAB四種不同片斷大小多型性外膜蛋白90（POMP90）的編碼基因，構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)

2、粒，在E．coli BL21中大量誘導(dǎo)表達(dá)，通過純化及復(fù)性后得到純度高、免疫學(xué)活性好的POMP90重組蛋白，并以它們?yōu)榘豢乖?，建立了豬CAB間接ELISA抗體檢測方法，探討了其在豬CAB感染血清學(xué)檢測中的應(yīng)用價值。
　　 1．根據(jù)已知基因序列設(shè)計引物，以流產(chǎn)嗜性衣原體CP/12株的總DNA為模板，PCR擴增了四種不同片斷大小的pomp90基因，將目的基因與原核表達(dá)載體pGEX-KG進行連接，構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒，經(jīng)測序證實構(gòu)建成功

3、。
　　 2．將構(gòu)建成功的重組質(zhì)粒在E．coli BL21高效表達(dá)，融合蛋白POMP-GST經(jīng)純化、復(fù)性后進行Western-blot檢測，結(jié)果表明四種重組蛋白均具有較強的反應(yīng)原性。
　　 3．分別以純化后的四種重組蛋白作為包被抗原，經(jīng)各項條件的優(yōu)化，建立了間接ELISA抗體檢測方法，并對大量的臨床血清樣品進行了檢測。結(jié)果表明，該間接ELISA抗體檢測方法具有靈敏度高、特異性好、準(zhǔn)確等優(yōu)點，且克服了傳統(tǒng)間接血凝試驗低靈敏