絲狀支原體山羊亞種PG3分離培養(yǎng)及LppA基因克隆.pdf

1、山羊傳染性胸膜肺炎是近年來(lái)養(yǎng)羊者感到頭痛的一大疾病，在臨床上，病羊表現(xiàn)咳嗽，發(fā)熱、病羊30-50﹪急性死亡，久病不愈的病羊常消瘦，喪失生產(chǎn)性能。山羊傳染性胸膜肺炎在非洲、中東、東歐、前蘇聯(lián)和遠(yuǎn)東等許多國(guó)家都有報(bào)道。它是世界上主要養(yǎng)羊國(guó)家面臨的嚴(yán)重山羊疾病之一，并被認(rèn)為是世界上危害性最大的山羊疾病，直接的損失是由于它的高死亡率，產(chǎn)奶、產(chǎn)肉率下降，以及疾病監(jiān)控、診斷、治療的成本過(guò)高。 在重慶地區(qū)我們對(duì)云陽(yáng)、北碚、江津等區(qū)縣的羊群進(jìn)行

2、調(diào)查，發(fā)現(xiàn)養(yǎng)殖數(shù)量在20頭以上群體，有30﹪的羊群均存在此病，部分群體感染發(fā)病率高達(dá)90﹪以上，羊傳染性胸膜肺炎已嚴(yán)重影響到重慶市肉羊養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。目前，對(duì)羊傳染性胸膜肺炎用疫苗進(jìn)行免疫通常由于各地流行菌株間存在的差異而效果不好，也無(wú)特效藥進(jìn)行治療，且往往治療成本太高而影響生產(chǎn)效益。因此，對(duì)重慶市發(fā)生的羊傳染性胸膜肺炎進(jìn)行病原學(xué)研究，對(duì)凈化羊群傳染性胸膜肺炎，解決我市養(yǎng)羊業(yè)的頭痛問(wèn)題，促進(jìn)我市山羊產(chǎn)業(yè)化的順利發(fā)展具有重要意義。

3、絲狀支原體山羊亞種的膜表面抗原LppA的基因序列是在絲狀支原體山羊亞種中的251號(hào)堿基到1822號(hào)堿基。其是絲狀支原體山羊亞種重要的抗原組成，所以本論文對(duì)于LppA做了研究，旨在為山羊胸膜肺炎的高保護(hù)率的核酸疫苗的進(jìn)一步研究做鋪墊。 首先，對(duì)重慶北碚天府鎮(zhèn)某羊場(chǎng)患有山羊傳染性胸膜肺炎的山羊進(jìn)行剖檢分離病原，用改良的支原體培養(yǎng)基進(jìn)行分離培養(yǎng)，并做生化試驗(yàn)，結(jié)果初步判定為絲狀支原體山羊亞種PG3株引起發(fā)病。在這過(guò)程中，對(duì)于支原體培養(yǎng)

4、基做了改進(jìn)，改良培養(yǎng)基縮短了以往山羊支原體的培養(yǎng)時(shí)間，尤其在傳代培養(yǎng)時(shí)，平均變色時(shí)間為24-30小時(shí)，比已往報(bào)道的有關(guān)山羊支原體的培養(yǎng)時(shí)間平均縮短了36-48小時(shí)。 其次，根據(jù)絲狀支原體山羊亞種PG3株LppA基因序列，設(shè)計(jì)引物用于擴(kuò)增LppA基因的全長(zhǎng)序列。應(yīng)用PCR的方法獲得絲狀支原體山羊亞種PG3株LppA基因DNA，并將用引物擴(kuò)增得到的LppA基因插入pUCm-T載體中，PCR鑒定并用HindⅢ+BamHI酶切鑒定篩選陽(yáng)