沙眼衣原體臨床株的分離培養(yǎng)及PCR-RFLP基因分型研究.pdf

1、沙眼衣原體(Chlaydia trachomatis，Ct)是目前國(guó)內(nèi)外最常見(jiàn)的性病病原體之一，也是非淋球菌性尿道炎(non-gonococcal urethritis，NGU)的主要病原體。據(jù)世界衛(wèi)生組織估計(jì)，每年有9300萬(wàn)新發(fā)病例，給社會(huì)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。泌尿生殖道Ct感染的發(fā)病率在我國(guó)有逐年增加的趨勢(shì)，已成為危害公共健康的一大問(wèn)題。泌尿生殖道的Ct感染可引起多種疾病，除引起非淋菌性尿道炎外，還可引起多種并發(fā)癥。目前認(rèn)為Ct的致

2、病性與其不同型別有關(guān)，至今已發(fā)現(xiàn)19種Ct血清型。常用的Ct分型方法有血清學(xué)分型和基因分型兩種，其中血清分型繁瑣、耗時(shí)，且需培養(yǎng)傳代獲得高濃度的抗原，限制了其廣泛應(yīng)用；基因分型能在較短時(shí)間內(nèi)獲得相應(yīng)結(jié)果而取代血清分型，成為目前Ct分型的主要方法。Ct的基因分型是檢測(cè)特定型別的流行動(dòng)態(tài)、臨床判定治療與再感染、流行病學(xué)調(diào)查等各方面研究的基礎(chǔ)，同時(shí)對(duì)建立Ct不同基因型與不同臨床過(guò)程的關(guān)系、推斷來(lái)源、判斷預(yù)后等都有著重要作用。此外，Ct基因分型

3、多以主要外膜蛋白基因(即ompl基因)為基礎(chǔ)，因而能夠?yàn)閛mpl遺傳變異機(jī)制的研究提供有益信息，從而有利于Ct疫苗的研制。 目的：通過(guò)培養(yǎng)法和PCR法分離得到Ct臨床株，以PCR-RFLP法對(duì)獲得的臨床標(biāo)本進(jìn)行基因分型，了解本地區(qū)性病門診Ct的基因型分布，并探索其臨床過(guò)程與基因型的關(guān)系。在Ct E型標(biāo)準(zhǔn)株培養(yǎng)的基礎(chǔ)上，建立一套適應(yīng)于我所實(shí)驗(yàn)室的成熟可行的Ct臨床株培養(yǎng)篩查方法，保留Ct臨床株，為進(jìn)一步深入研究奠定基礎(chǔ)。

4、方法：收集了2005年4月～2005年12月期間到天津市性傳播疾病研究所門診就診患者的尿道或?qū)m頸拭子213例，所有患者均符合采集標(biāo)準(zhǔn)，并記錄其臨床相關(guān)資料。在Ct E型標(biāo)準(zhǔn)株培養(yǎng)的基礎(chǔ)上行臨床標(biāo)本的細(xì)胞培養(yǎng)，對(duì)陽(yáng)性標(biāo)本行PCR擴(kuò)增出ompl基因。同時(shí)用質(zhì)粒PCR篩選陽(yáng)性臨床標(biāo)本，PCR擴(kuò)增得到ompl基因。用AluⅠ和Msp Ⅰ內(nèi)切酶酶切ompl基因，10％聚丙烯酰胺凝膠垂直電泳后與各型Ct標(biāo)準(zhǔn)株理論酶切后的結(jié)果比較得出分型結(jié)果，并總結(jié)

5、Ct型別與患者臨床過(guò)程和特點(diǎn)的相關(guān)性。 結(jié)果：首先培養(yǎng)臨床標(biāo)本共得到27例陽(yáng)性臨床株，同時(shí)用質(zhì)粒引物擴(kuò)增臨床標(biāo)本，陽(yáng)性標(biāo)本再經(jīng)PCR擴(kuò)增得到ompl基因，共得到33例陽(yáng)性臨床株可用于RFLP基因分型。經(jīng)分型共檢出5個(gè)基因型，其中E型25例、F型2例、D型1例、G型3例、J型2例。比較E型與其它各型在不同年齡段的分布上有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著差異，而在性別、病程、有無(wú)非婚性接觸、學(xué)歷等各方面無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著差異。 結(jié)論：