桃PG酶基因啟動(dòng)子克隆及序列分析.pdf

1、桃是我國(guó)最古老的果樹(shù)之一，屬于薔薇科(Rosaceae)桃亞屬(Amygdalus Prunus persica (L.)Batsch.)果樹(shù)，生長(zhǎng)遍及南北半球溫帶地區(qū)。其果實(shí)屬于呼吸躍變型，在發(fā)育與成熟過(guò)程中果實(shí)經(jīng)歷著色澤、質(zhì)地、風(fēng)味等一系列的深刻變化，特別是在采后的后熟階段，果實(shí)硬度下降很快，降低了果實(shí)的商品性能。
　　 在桃果實(shí)后熟階段多聚半乳糖醛酸酶(PG酶)起主要作用，它可以使果實(shí)的果膠物質(zhì)降解、細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)破壞，導(dǎo)致果

2、實(shí)快速軟化。該酶的釋放與表達(dá)是受基因嚴(yán)格調(diào)控的，而啟動(dòng)子是基因表達(dá)調(diào)控的重要順式元件，對(duì)基因表達(dá)與否以及表達(dá)量的高低起著重要作用。延緩果實(shí)后熟、抑制PG酶的表達(dá)，進(jìn)而創(chuàng)造新的種質(zhì)，因此研究PG基因的調(diào)控元件——啟動(dòng)子就具有了重要意義。
　　 本研究的主要目的是克隆桃PG基因的啟動(dòng)子，對(duì)該啟動(dòng)子序列進(jìn)行分析，并在此基礎(chǔ)上構(gòu)建缺失表達(dá)載體，為下一步研究其功能奠定基礎(chǔ)。
　　 研究的主要內(nèi)容為：比對(duì)已報(bào)道的桃PG基因序列，依據(jù)

3、引物設(shè)計(jì)原則，設(shè)計(jì)三條特異引物；通過(guò)改良CTAB法提取DNA；采用Tail-PCR方法擴(kuò)增并克隆到桃PG基因5′端側(cè)翼序列，并對(duì)該序列進(jìn)行分析；登陸NCBI進(jìn)行BLASTn比對(duì)；序列提交GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)；擴(kuò)增并克隆缺失片段，構(gòu)建缺失表達(dá)載體。
　　 研究結(jié)果表明克隆到的986bp序列3′端與已報(bào)道的PG酶基因序列的5′端部分序列同源性為96％，剩余5′端906bp在GenBank中沒(méi)有同源片段，表明該片段為PG酶基因5′端側(cè)

4、翼序列。遞交數(shù)據(jù)庫(kù)，登陸號(hào)為FJ940722。用Neural Network Promoter Prediction、PLACE等軟件對(duì)序列進(jìn)行基礎(chǔ)啟動(dòng)子、轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)、順式作用元件和起始密碼子等分析，發(fā)現(xiàn)在789bp-839bp位置存在基礎(chǔ)啟動(dòng)子序列，轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)是位于828 bp的堿基C，其可能性為0.98；序列中含有豐富的順式作用元件，除了具有基本的CAAT-BOX和TATA-BOX外，還含有其他重要作用元件GATA-BOX、 A