紫花苜蓿MsZFN鋅指蛋白基因啟動(dòng)子MsZPP的克隆與序列分析.pdf

1、紫花苜蓿（Medicago sativa L.）是世界上分布最廣的一種多年生豆科牧草，也是我國(guó)最重要的豆科牧草之一。它不僅產(chǎn)量高且營(yíng)養(yǎng)豐富，被譽(yù)為“牧草之王”。傳統(tǒng)的育種方法主要是通過(guò)雜交的手段獲得新品種，需要的周期長(zhǎng)，工作量大。將分子生物學(xué)的方法運(yùn)用到了抗性育種工作中，可以縮短育種年限，提高育種效率。本試驗(yàn)主要研究的是一個(gè)鋅指蛋白基因的啟動(dòng)子。鋅指蛋白是真核生物基因組中最豐富的一類轉(zhuǎn)錄因子，這種蛋白質(zhì)與Zn2+結(jié)合形成穩(wěn)定的手指結(jié)構(gòu)，

2、在基因的表達(dá)調(diào)控、細(xì)胞分化、胚胎發(fā)育等生命過(guò)程中發(fā)揮重要作用。動(dòng)物及人體內(nèi)的鋅指蛋白的功能已經(jīng)有了較為深入的了解，近年來(lái)，通過(guò)不斷的研究發(fā)現(xiàn)，鋅指蛋白在植物中也發(fā)揮了重要作用，參與了植物抵御其生長(zhǎng)過(guò)程中所經(jīng)歷的各種脅迫反應(yīng)。 啟動(dòng)子（promoter）是RNA聚合酶能夠識(shí)別并與之結(jié)合，從而起始基因轉(zhuǎn)錄的序列[76]，作為轉(zhuǎn)錄水平上一種重要的調(diào)控元件，研究啟動(dòng)子，對(duì)我們了解生物的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程，探討生物對(duì)其生長(zhǎng)環(huán)境的適應(yīng)機(jī)制以及更好

3、地控制外源基因在轉(zhuǎn)基因植物中的表達(dá)等具有重要意義。本研究取得的主要結(jié)果如下： 1.應(yīng)用巢式PCR技術(shù)，克隆獲得了鋅指蛋白基因MsZFN的上游啟動(dòng)子區(qū)，大約1500bp左右，在Blast數(shù)據(jù)庫(kù)上進(jìn)行同源性比較，該基因?yàn)槭状潍@得，與截形苜蓿7號(hào)染色體克隆mth2—36p20的全序列有88％的相似性。在GenBank上登錄，登錄號(hào)為FJ161979.1，命名為MsZPP。對(duì)獲得的序列進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)了多個(gè)CAAT—box和TATA—bo

4、x，TATA框具有將RNA聚合酶Ⅱ引導(dǎo)到正確的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)的功能，CAAT框主要控制著轉(zhuǎn)錄的起始頻率，是調(diào)控轉(zhuǎn)錄速率的元件，與啟動(dòng)子的特異性無(wú)直接的關(guān)系。還發(fā)現(xiàn)了多個(gè)潛在的順式作用元件，如與ABA誘導(dǎo)相關(guān)的順式作用元件ABA響應(yīng)元件（ABRE），與干旱誘導(dǎo)有關(guān)的MYB結(jié)合位點(diǎn)（MBS），與茉莉酸甲酯反應(yīng)相關(guān)的順式調(diào)控元件TGACG—motif，以及多個(gè)光響應(yīng)元ACE，G—box，GTl—motif， I—box，SpI。 2.構(gòu)