誘導(dǎo)型啟動子pGⅢ調(diào)控元件及轉(zhuǎn)基因水稻研究.pdf

1、本文從大麥中克隆了GⅢ基因啟動子pGⅢ,與gus報告基因構(gòu)建了植物表達載體,以水稻為轉(zhuǎn)化受體,通過gus報告基因表達量的分析,對該啟動子的誘導(dǎo)活性進行測定并對其調(diào)控元件進行了初步研究.根據(jù)已發(fā)表的序列,本文從大麥(Hordeum vulgare L. cv.Clipper)中克隆了GⅢ基因啟動子pGⅢ(1310 bp),并與gus報告基因構(gòu)建了植物表達載體pGⅢ-GUS.農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化水稻(Oryza sativa L. cv.Taip

2、ei 309),獲得了轉(zhuǎn)基因水稻15株.通過5′缺失法分別獲得了約1.1kb、712bp、572 bp、 359 bp、116 bp的pGⅢ缺失體片段(pG1~pG5),并分別與gus報告基因構(gòu)建了植物表達載體.農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化水稻,對其在水稻愈傷組織中的誘導(dǎo)活性進行了研究.GUS組織化學(xué)染色結(jié)果表明,SA和激發(fā)子處理的各轉(zhuǎn)化愈傷均有GUS藍色;細胞觀察結(jié)果表明gus基因在愈傷細胞中獲得了表達.GUS定量分析結(jié)果表明,SA誘導(dǎo)后pG1~p

3、G4驅(qū)動的gus基因表達均表現(xiàn)出了較高的誘導(dǎo)活性,比對照升高了16~32倍.激發(fā)子誘導(dǎo)后,pG1~pG3驅(qū)動的gus基因表達均表現(xiàn)出了較高的誘導(dǎo)活性,比對照升高了19~47倍;pG1的誘導(dǎo)活性均為最高.pG3缺失體片段包含了上述保持激發(fā)子與SA誘導(dǎo)活性所必需的序列,為了進一步檢測pG3在水稻植株中的誘導(dǎo)活性,本文對該啟動子的轉(zhuǎn)基因水稻進行了研究.通過PCR檢測,證實獲得了11株含pG3/gus嵌合基因的轉(zhuǎn)基因水稻.以上結(jié)果表明pGⅢ為一