山楂活性組份CP聯(lián)合β-內(nèi)酰胺類抗生素對(duì)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的抗菌作用.pdf

1、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)是醫(yī)院感染的重要病原菌,也是引起燒傷、嚴(yán)重創(chuàng)傷后感染的最常見致病菌之一。在金黃色葡萄球菌感染中,MRSA所致的醫(yī)院感染越來(lái)越流行,尤其在ICU、和燒傷病房等,MRSA的檢出率都有明顯增高的趨勢(shì),最高可達(dá)90％以上,成為臨床亟待解決的難題。
　　 MRSA的耐藥機(jī)制主要與其大量表達(dá)PBP2a蛋白有關(guān),該蛋白由

2、668個(gè)氨基酸組成,分子量為76.1 kDa,其C-未端功能域(327-668 aa),具有轉(zhuǎn)肽酶(Tpase)功能,能有效促進(jìn)細(xì)菌細(xì)胞壁的合成與修復(fù),且活性不受β-內(nèi)酰胺類抗生素的抑制,從而表現(xiàn)出耐藥性。尋找能夠消解MRSA的耐藥性來(lái)控制其感染的措施具有重要的臨床意義。
　　 目的：
　　 本研究旨在以MRSA主要耐藥蛋白PBP2a為靶點(diǎn),應(yīng)用生物傳感器技術(shù)及體外藥敏實(shí)驗(yàn),篩選出具有通過(guò)拮抗PBP2a活性而增強(qiáng)β-內(nèi)酰

3、胺類抗生素抗菌作用的中藥,并對(duì)其進(jìn)行分離純化,以期得到具有聯(lián)合抗菌生物活性的組份或單體化合物。
　　 方法
　　 1.以PBP2a C-末端功能域(327-668 aa)為靶點(diǎn),利用生物傳感器技術(shù)篩選與PBP2a具有特異性結(jié)合力的中藥;
　　 2.通過(guò)體外藥敏實(shí)驗(yàn),篩選具有聯(lián)合β-內(nèi)酰胺類抗生素-苯唑西林發(fā)揮協(xié)同抗菌作用的中藥;
　　 3.對(duì)于篩選到的藥物,以聯(lián)合苯嘩西林的抗菌活性為追蹤,進(jìn)行成分的分離純

4、化,制備活性組份或活性單體化合物;
　　 4.通過(guò)體外藥敏實(shí)驗(yàn),評(píng)價(jià)分離制備的活性組份或單體化合物與多種β-內(nèi)酰胺類抗生素的聯(lián)合抗菌活性。
　　 結(jié)果：
　　 1.在對(duì)78種中藥進(jìn)行PBP2a C-未端的生物傳感器結(jié)合實(shí)驗(yàn)中,我們發(fā)現(xiàn)雷公藤、山楂、魚腥草、赤芍、側(cè)柏葉、黃連、藏青果、石榴皮、大黃等9種中藥具有高于200RU的PBP2a C-末端特異性結(jié)合力;
　　 2.體外藥敏實(shí)驗(yàn)證實(shí),在78種中藥中,山

5、楂、石榴皮、丁香、兒茶等4種與苯唑西林的部分抑菌指數(shù)值(FIC)小于1,具有聯(lián)合抑菌作用。在這4種藥物中,山楂與PBP2a的特異結(jié)合值最高,為365.22RU。因此,將山楂為作為下步研究對(duì)象,進(jìn)行活性成分的分離提取。
　　 3.對(duì)山楂進(jìn)行75％乙醇水提取,經(jīng)萃取、大孔樹脂柱色譜、硅膠柱色譜進(jìn)行成分分離,獲得具有明顯增強(qiáng)苯唑西林抗MRSA活性的組份CP;4.通過(guò)與苯唑西林、舒氨西林、氨芐西林、頭孢唑林等4種抗生素的聯(lián)合藥敏試驗(yàn),進(jìn)

6、一步證實(shí)CP組份與四種抗生素對(duì)MRSA的部分抑菌指數(shù)值(FIC)分別為0.31、0.37、0.31、0.26,提示CP組份具有對(duì)β-內(nèi)酰胺類抗生素的抗菌增敏作用。
　　 結(jié)論：
　　 本研究通過(guò)生物傳感器實(shí)驗(yàn)和體外藥敏實(shí)驗(yàn),篩選到與PBP2a具有較高特異性結(jié)合力,且具有聯(lián)合β-內(nèi)酰胺類抗生素抑制MRSA作用的藥物山楂;以體外聯(lián)合藥敏實(shí)驗(yàn)作為活性追蹤,對(duì)山楂組份進(jìn)行系統(tǒng)分離提取,從中獲得具有較強(qiáng)的聯(lián)合抗菌活性的CP組分;并