金黃色葡萄球菌對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類抗生素耐藥機(jī)制的研究.pdf

1、大環(huán)內(nèi)酯類抗生素廣泛地用于治療細(xì)菌感染，多數(shù)臨床分離金黃色葡萄球菌感染對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類抗生素耐藥。研究體外耐藥金黃色葡萄球菌抗菌活性及對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的耐藥機(jī)制，對(duì)臨床治療耐大環(huán)內(nèi)酯類金黃色葡萄球菌引起的感染和開發(fā)新的大環(huán)內(nèi)酯類藥物有著重要意義。 目的： 研究四川大學(xué)華西醫(yī)院分離的18株金黃色葡萄球菌對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的耐藥性及其耐藥機(jī)制，為臨床合理使用抗生素提供參考。 方法： 收集、分離及鑒定金黃色葡萄球

2、菌，用瓊脂二倍稀釋法及紙片擴(kuò)散法測(cè)定臨床分離金黃色葡萄球菌對(duì)抗菌藥物MIC值，以標(biāo)準(zhǔn)敏感菌株ATCC25923糞腸球菌ATCC29212作為質(zhì)控菌株；同時(shí)做泵抑制劑羰基氰氯苯腙(CCCP)、利血平的逆轉(zhuǎn)試驗(yàn)。紙片擴(kuò)散法檢測(cè)耐藥金黃色葡萄球菌，參照NCCLS2005標(biāo)準(zhǔn)用以篩選其對(duì)克林霉素誘導(dǎo)型耐藥株。誘導(dǎo)型耐藥株用D試驗(yàn)檢測(cè)，提取10株細(xì)菌的質(zhì)粒和染色體DNA，擴(kuò)增產(chǎn)物片段長(zhǎng)度分別為610bp，359bp，520bp。同時(shí)對(duì)1株耐藥菌株

3、ermb和eFmc基因進(jìn)行PCR-DNA直接測(cè)序分析。用0.22μ m微孔濾膜構(gòu)建金黃色葡萄球菌生物膜模型；測(cè)定克拉霉素、環(huán)丙沙星的MIC值；銀染金黃色葡萄球菌生物膜，掃描電鏡(SEM)觀察生物膜形態(tài)結(jié)構(gòu)，連續(xù)稀釋法進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。同時(shí)用高效液相色譜(HPLC)檢測(cè)大環(huán)內(nèi)酯類抗生素存在時(shí)的環(huán)丙沙星透過生物膜后的滲透濃度。 結(jié)果： MIC測(cè)定結(jié)果顯示，10株耐藥金黃色葡萄球菌對(duì)7種大環(huán)內(nèi)酯類藥物無(wú)一株敏感，且表現(xiàn)出較高水平的

4、耐藥。對(duì)其它抗菌素的耐藥率由高到低依次是苯唑西林、氯霉素、克林霉素、慶大霉素、環(huán)丙沙星。而對(duì)于萬(wàn)古霉素未發(fā)現(xiàn)有耐藥株。耐藥金黃色葡萄球菌D試驗(yàn)陽(yáng)性率為40％，同時(shí)聯(lián)用CCCP、利血平前后，對(duì)紅霉素、克拉霉素、阿奇霉素、麥迪霉素的MIC值出現(xiàn)了明顯變化的菌株分別有6、7、7、6株和7、6、7、4株。 PCR結(jié)果顯示9株菌擴(kuò)增出ermC基因，1株細(xì)菌擴(kuò)增出ermB基因,ermA基因?yàn)殛幮?。?jīng)DNA的序列比對(duì)分析發(fā)現(xiàn)：ermB、erm

5、c基因顯示出各自的同源性為99％。erinB基因第159位堿基由G→A；第213位堿基由A→G；其編碼的氨基酸并未發(fā)生改變；ermC基因第389位堿基由A→G；其編碼的氨基酸由谷氨酸(Glu)130→甘氨酸(G1y)；生物膜(BF)可在七天內(nèi)穩(wěn)定形成，1/16MIC、1/4MIC濃度克拉霉素、阿奇霉素顯著減少單用環(huán)丙沙星組中的BF活菌數(shù)(P<0.05)。聯(lián)用克拉霉素后，環(huán)丙沙星的生物膜滲透性得到提高。 結(jié)論： 1. er