解脲脲原體對大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的敏感性及耐藥機制研究.pdf

1、研究背景與目的：解脲脲原體是人體泌尿生殖道感染的常見病原體之一。近年來,隨著大環(huán)內(nèi)酯類抗生素在臨床上的廣泛使用,解脲脲原體對該類藥物的耐藥率逐年上升。因此,本研究的目的是：(1)了解南京地區(qū)解脲脲原體對臨床常用大環(huán)內(nèi)酯類藥物克拉霉素和阿奇霉素的耐藥狀況并提出用藥建議；(2)研究解脲脲原體對大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的耐藥機制。 研究方法：(1)用法國梅里埃支原體鑒定試劑盒進行解脲脲原體(Ureaplasma urealyticum,Uu)

2、的初步分離和鑒定,并對解脲脲原體培養(yǎng)陽性物進一步經(jīng)過濾培養(yǎng)和特異性PCR試驗進行確認。(2)采用微量肉湯培養(yǎng)法檢測確認的309株解脲脲原體對臨床常用大環(huán)內(nèi)酯類藥物克拉霉素和阿齊霉素的最低抑菌濃度(Minimum inhibitory concentration,MIC)。(3)根據(jù)藥敏結果分層,從309株解脲脲原體菌株中,選取耐藥、敏感、中介的菌株,應用primer3在線設計程序,自行設計引物,PCR擴增不同耐藥菌株的核糖體蛋白L4、L

3、22、L16、L23,以及23S rRNA的II區(qū)和V區(qū),并對擴增產(chǎn)物進行測序,采用Blast比對法比較臨床菌株序列與標準菌株序列的差異。(4)針對藥敏試驗中的敏感株進行體外的克拉霉素和阿奇霉素的藥物誘導,將其誘導成耐藥株后,再進行相關耐藥機制的研究。 研究結果：(1)本研究共采集標本576份,分離培養(yǎng)解脲脲原體341株,能良好傳代進行藥敏試驗的309株。(2)309株解脲脲原體對克拉霉素和阿齊霉素的耐藥率分別為9.6％和21.

4、6％,MIC50為0.25mg/L和4mg/L,MIC90為1mg/L和8mg/L。(3)在耐藥株X01核糖體蛋白L4上,出現(xiàn)第67位谷氨酰胺(Q)→賴氨酸(K)和71位甘氨酸(G)→絲氨酸(S)的改變,耐藥株C360、Y187、Z08在核糖體蛋白L4的第25位氨基酸處分別發(fā)生了頡氨酸(V)→谷氨酸(E)、頡氨酸(V)→丙氨酸(A)和頡氨酸(V)→苯丙氨酸(F)的改變。(3)在耐藥株Y187上,23S rRNA的2566處堿基T→C,2

5、569處缺失堿基G,262l處堿基A→T。敏感株3736在2243處發(fā)生G→A的堿基突變。(4)敏感株Y292經(jīng)阿奇霉素誘導耐藥后,L22核糖體蛋白上有10個位點的堿基發(fā)生突變,導致9個氨基酸改變。 研究結論：(1)南京地區(qū)解脲脲原體對臨床常用的兩種大環(huán)內(nèi)酯類藥物克拉霉素和阿齊霉素存在不同程度的耐藥,阿齊霉素的耐藥率較高,應引起臨床重視。(2)核糖體蛋白L4、L22以及23S rRNA上相應區(qū)域堿基、氨基酸的改變,可能是導致解脲