轉(zhuǎn)基因雙歧桿菌治療小鼠實驗性結(jié)腸炎的機理研究.pdf

1、目的:潰瘍性結(jié)腸炎是一種病因未明的慢性腸道炎癥性疾病。雙歧桿菌作為腸道內(nèi)的益生菌,已證實對UC具有良好的治療效果。IL-10能通過降低炎癥級聯(lián)放大反應,為炎癥負性調(diào)控的細胞因子。本實驗通過研究攜帶hIL-10的分泌型轉(zhuǎn)基因雙歧桿菌(BL-hIL-10)對小鼠實驗性結(jié)腸炎治療效果,探討 BL-hIL-10治療UC的可能機理。
　　方法:篩選出能穩(wěn)定表達具有生物活性hIL-10蛋白的BL-hIL-10菌株。用5％DSS誘導UC小鼠模型

2、,分為正常對照組、UC模型組、BL治療組、BL0治療組和BL-hIL-10治療組。計算小鼠DAI、HE染色評估結(jié)腸組織病理學變化;ELISA法測小鼠血漿及結(jié)腸組織IL-13、VEGF-A和NO的含量;熒光定量PCR檢測小鼠結(jié)腸組織Claudin1、2、4、5、7、8、P53、PUMA、Fas、FasL、Perforin、Caspase-3、iNOS、eNOS、VEGF-A表達水平;Tunel法檢測小鼠結(jié)腸上皮細胞的凋亡;Evan’s B

3、lue法檢測小鼠結(jié)腸粘膜組織的滲透性。
　　結(jié)果:(1)成功篩選出能穩(wěn)定表達hIL-10的BL-hIL-10菌株。(2)BL-hIL-10可以降低UC小鼠DAI,減輕UC小鼠結(jié)腸組織炎癥程度。(3) BL-hIL-10能降低UC小鼠血漿和結(jié)腸組織NO、VEGF-A和IL-13水平。(4) BL-hIL-10能下調(diào)UC小鼠結(jié)腸組織P53、PUMA、Fas、FasL、Caspase-3、Claudin2及iNOS的mRNA表達水平,同

4、時能夠上調(diào)Claudin1、4、5、7、8、Bcl-2及eNOS的mRNA表達水平。(5)BL-hIL-10治療能抑制UC小鼠結(jié)腸上皮細胞的凋亡。(6) BL-hIL-10治療能降低UC小鼠結(jié)腸粘膜的滲透性。(7)BL-hIL-10治療組對UC小鼠的治療效應明顯優(yōu)于BL治療組和BL0治療組。
　　結(jié)論:(1)BL-hIL-10通過降低UC小鼠的VEGF-A的表達,抑制iNOS產(chǎn)生NO,同時提高eNOS的表達,下調(diào)VEGF-A的表達