Gal-9在實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎中的作用機(jī)制研究.pdf

1、研究背景
　　炎癥性腸病(Inflammatoryboweldisease，IBD)是一種病因尚不明確的慢性非特異性腸道炎癥性疾病，包括克羅恩病(Crohn'sdisease，CD)和潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerativecolitis，UC)。近年來(lái)，其發(fā)病率在我國(guó)明顯上升，已成為消化系統(tǒng)的常見(jiàn)疾病[1]。我們前期研究發(fā)現(xiàn)細(xì)菌產(chǎn)物鞭毛蛋白(CBir1)在炎癥性腸病的發(fā)生與發(fā)展中起重要作用，而且研究發(fā)現(xiàn)Th1和Th17細(xì)胞免疫應(yīng)答異常

2、與IBD發(fā)生有關(guān)[2]。腫瘤壞死因子(TumorNecrosisFactor，TNF)α及白細(xì)胞介素(Interleukin，IL)17是Th1及Th17細(xì)胞主要分泌的細(xì)胞因子，在多種炎性反應(yīng)及自身免疫性疾病病理過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。Gal-9是半乳糖凝集素(Galectin，Gal)家族的一員，在細(xì)胞的粘附聚集、細(xì)胞凋亡、嗜酸性粒細(xì)胞的趨化與激活、自身免疫性疾病、炎癥反應(yīng)的調(diào)控等方面具有重要作用[3]。Gal-9能與T細(xì)胞免疫球蛋白3(

3、Tim-3)結(jié)合，誘導(dǎo)Th1細(xì)胞的凋亡，促使調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)發(fā)展[4]，可以阻止Th1與Th17細(xì)胞因子釋放[5]。由于IBD的主要發(fā)病特征包括Th1和（或）Th17細(xì)胞因子的過(guò)度釋放，而Gal-9通過(guò)與受體Tim-3結(jié)合，能夠激活抗病原體的免疫系統(tǒng)，能夠阻止IBD腸道的炎癥的反應(yīng)[6]。因此提示Gal-9可能參與IBD的發(fā)病過(guò)程。
　　目的
　　通過(guò)對(duì)IBD模型小鼠進(jìn)行不同干預(yù)，觀察IBD動(dòng)物模型的結(jié)腸組織學(xué)變化，

4、檢測(cè)小鼠的血清及結(jié)腸組織Gal-9的水平，探討Gal-9在結(jié)腸炎發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　方法
　　將75只SPF級(jí)雄性健康BALb/c小鼠隨機(jī)分為5組:①對(duì)照組:自由飲食，不進(jìn)行干預(yù)。②TNBS組:灌腸前禁食24小時(shí)，自由飲水。第1、8、15天分別用2.0mg、2.5mg、3.0mgTNBS加50％乙醇溶液100ul灌腸。③TNBS+CBir1組:將10ugCBir1溶于生理鹽水100μl于第7、9、12、15天腹腔注射10

5、0μl此溶液。④TNBS+TNFα組:將0.1ugTNF-α溶于生理鹽水100μl，腹腔注射100ul，每周2次。⑤TNBS+IL-17組:腹腔注射IL-17500ng，每周2次。對(duì)各組小鼠用DAI進(jìn)行評(píng)分，于第22天處死各組小鼠，取外周血ELISA檢測(cè)Gal-9濃度，取結(jié)腸組織HE染色，并給予HI評(píng)分，免疫組化法檢測(cè)結(jié)腸組織Gal-9的表達(dá)。
　　用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析所得數(shù)據(jù)，定量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，方差

6、齊性用Levene方法檢驗(yàn)，多組數(shù)據(jù)用單因素方差分析(One-wayANOVA)，有意義者用LSD-t法兩兩比較。率的比較采用卡方檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果
　　(1)結(jié)腸粘膜層可見(jiàn)淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞浸潤(rùn)，局部可見(jiàn)淋巴濾泡反應(yīng)性增生。TNBS組、TNBS+CBir1組、TNBS+TNFα組、TNBS+IL-17組與正常組比較，粘膜層可見(jiàn)淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞逐漸增多，局部淋巴濾泡反應(yīng)性增

7、生逐漸增多，炎癥程度逐漸加重。在正常組小鼠結(jié)腸上皮組織中，Gal-9在細(xì)胞膜、細(xì)胞核有散在表達(dá)，細(xì)胞膜、細(xì)胞漿可見(jiàn)棕色顆粒，TNBS組、TNBS+CBir1組、TNBS+TNF-α組、TNBS+IL-17組與正常組比較，染色強(qiáng)度均減弱，Gal-9的表達(dá)均降低。
　　(2)TNBS組、TNBS+CBir1組、TNBS+TNF-α組與TNBS+IL-17組的DAI評(píng)分、HI評(píng)分明顯高于正常組，而Gal-9在血清中的表達(dá)較正常組比較逐漸

8、降低，TNBS+CBir1組、TNBS+TNF-α組、TNBS+IL-17組與TNBS組、TNBS組與正常組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);在結(jié)腸上皮組織中，Gal-9的表達(dá)也逐漸降低，TNBS+CBir1組、TNBS+TNF-α組、TNBS+IL-17組與TNBS組、TNBS組與正常組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論
　　(1)細(xì)菌鞭毛蛋白能夠抑制Gal-9的表達(dá);
　　(2)TNF-α和