雷公藤紅素對(duì)小鼠實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎的作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的:探討雷公藤紅素對(duì)小鼠實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎的作用及可能存在的機(jī)制。
　　方法:36只雌性C57BL/6J小鼠隨機(jī)分為三組，每組12只，分別為：正常組、模型組、雷公藤紅素組。模型組小鼠自由飲用5％葡聚糖硫酸鈉鹽(dextran sulfate sodium salt, DSS)4天，之后自由飲用無菌水及腹腔注射生理鹽水7天；雷公藤紅素組小鼠自由飲用5%DSS4天，之后自由飲用無菌水及腹腔注射雷公藤紅素(1 mg/kg)7天；正常組不接受

2、 DSS及雷公藤紅素處理。每天記錄小鼠體重變化、腹瀉及便血情況，計(jì)算疾病活動(dòng)指數(shù)(disease activity index, DAI)。11天后處死小鼠，取出結(jié)腸，測(cè)量各組小鼠結(jié)腸長(zhǎng)度。小鼠結(jié)腸H&E染色(hematoxylin and eosin staining, H&E staining)進(jìn)行病理學(xué)評(píng)分，阿爾新藍(lán)染色(alcian blue staining, AB staining)評(píng)價(jià)杯狀細(xì)胞功能。TUNEL熒光染色觀察小

3、鼠結(jié)腸組織中的細(xì)胞死亡。免疫印跡法(western blotting, WB)檢測(cè)小鼠結(jié)腸組織中 IL-1β、IL-6、RIP3、MLKL、TNF-α、Caspase-8的表達(dá)。免疫組化(immunohistochemistry, IHC)檢測(cè)MPO、E-cadherin、PCNA、RIP3、MLKL在各組小鼠結(jié)腸組織中的表達(dá)。
　　結(jié)果: DAI指數(shù)、小鼠結(jié)腸長(zhǎng)度與 H&E染色結(jié)果均提示雷公藤紅素組小鼠疾病嚴(yán)重程度顯著輕于模型組

4、。阿爾新藍(lán)染色及E-cadherin免疫組化染色提示雷公藤紅素具有保護(hù)小鼠結(jié)腸黏膜屏障的功能。PCNA及TUNEL染色提示雷公藤紅素具有抑制結(jié)腸上皮細(xì)胞進(jìn)一步死亡的作用。IL-1β、IL-6免疫印跡法及 MPO染色結(jié)果提示雷公藤紅素組小鼠結(jié)腸炎癥反應(yīng)輕于模型組。Western blotting結(jié)果表明雷公藤紅素組小鼠結(jié)腸組織中RIP3、MLKL的表達(dá)較模型組顯著降低；免疫組化染色進(jìn)一步提示RIP3、MLKL主要表達(dá)于小鼠結(jié)腸上皮細(xì)胞中。