大麻素受體-2對(duì)實(shí)驗(yàn)性小鼠結(jié)腸炎作用及其作用機(jī)制研究.pdf

1、研究背景：炎癥性腸病(inflammatory bowel disease，IBD)是一種慢性自身免疫性疾病，包括克羅恩病(crohn’s disease，CD)和潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis，UC)，主要表現(xiàn)為腹痛、腹瀉、血便、營養(yǎng)不良等，其發(fā)病原因及機(jī)制仍不明確，可能由遺傳、環(huán)境、自身免疫等多因素參與。近年來，IBD發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，并且缺乏特異性藥物治療，傳統(tǒng)的5-氨基水楊酸和糖皮質(zhì)激素雖然對(duì)該病有一定效

2、果，但其治療療程長，長期應(yīng)用后會(huì)出現(xiàn)耐藥或嚴(yán)重并發(fā)癥，探索新型高效的治療方法已經(jīng)成為目前研究的熱點(diǎn)。大麻素受體-2（cannabinoid receptor-2，CB2）是體內(nèi)新近發(fā)現(xiàn)的新型物質(zhì)，主要表達(dá)于扁桃體、脾臟等外周免疫器官，研究表明CB2參與免疫調(diào)節(jié)，在調(diào)節(jié)胃腸穩(wěn)態(tài)、痛覺、炎癥、腸道通透性等方面具有重要意義。腸內(nèi)炎癥是IBD發(fā)生過程中重要環(huán)節(jié)，CB2在有關(guān)腸內(nèi)炎癥方面研究仍不多，需通過進(jìn)一步研究來探討CB2對(duì)IBD的影響。

3、r>　　目的：觀察大麻素受體-2（CB2）對(duì)急性實(shí)驗(yàn)性小鼠結(jié)腸炎的保護(hù)作用，并從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（endoplasmic reticulum stress，ERS）方面探討其可能作用機(jī)制。
　　方法：32只SPF級(jí)C57BL/6雄性小鼠隨機(jī)均分為正常對(duì)照組（Normal group）、模型組（Model group）、CB2激動(dòng)劑組（CB2 agonist group）、CB2拮抗劑組（CB2 antagonist group）。除正常

4、對(duì)照組外，其余3組給予5％葡聚糖硫酸鈉建立急性結(jié)腸炎模型，按10 mg/（kg·d）劑量分別給予CB2激動(dòng)劑組、CB2拮抗劑組小鼠CB2激動(dòng)劑JWH-133、CB2拮抗劑AM630。觀察小鼠進(jìn)食、活動(dòng)、精神、毛發(fā)等一般情況，記錄小鼠疾病活動(dòng)度（disease activity index，DAI）及結(jié)腸組織病理學(xué)評(píng)分（histopathological score，HS）。采用ELISA法檢測(cè)各組小鼠結(jié)腸組織中炎癥因子TNF-α、IL-

5、10水平，免疫組化法檢測(cè)結(jié)腸組織CB2及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白GRP78、CHOP表達(dá)，RT-PCR法檢測(cè)結(jié)腸組織中GRP78、CHOP mRNA水平。
　　結(jié)果：①與正常對(duì)照組比較，模型組CB2表達(dá)無明顯差異（P>0.05），DAI、HS、GRP78、CHOP蛋白及mRNA水平、TNF-α水平顯著增高（P<0.05），IL-10水平下降（P<0.05）。②與模型組比較，CB2激動(dòng)劑組CB2表達(dá)明顯增多，DAI、HS、GRP78、CH

6、OP蛋白及mRNA水平、TNF-α水平降低（P<0.05），IL-10水平升高（P<0.05）③與模型組比較，CB2拮抗劑組中，CB2表達(dá)減少，DAI、HS、GRP78、CHOP蛋白及mRNA水平、TNF-α水平、IL-10水平無明顯差別（P>0.05）。④CB2激動(dòng)劑組中CB2表達(dá)與 DAI、 HS、 TNF-α表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性(r=-0.778,-0.749,-0.926,P<0.05)，與GRP78及其mRNA表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性（r=-

7、0.865、-0.932，P<0.05），與CHOP及其mRNA呈負(fù)相關(guān)性（r=-0.744、-0.803，P<0.05），與IL-10呈正相關(guān)性(r=0.916,P<0.05)。
　　結(jié)論：（1）CB2在實(shí)驗(yàn)性小鼠急性結(jié)腸炎時(shí)表達(dá)無明顯變化。（2）CB2激動(dòng)劑激活CB2表達(dá)增加，調(diào)節(jié)腸內(nèi)炎癥因子表達(dá)，對(duì)實(shí)驗(yàn)性小鼠結(jié)腸炎有抑制作用，而CB2拮抗劑對(duì)其影響不明顯，提示CB2對(duì)腸內(nèi)炎癥具有保護(hù)作用。（3）實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎小鼠腸黏膜存在劇烈