硒藻藍(lán)蛋白酶解多肽對(duì)小鼠實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎的拮抗作用.pdf

1、本論文利用葡聚糖硫酸鈉(dextran sulfate sodium,DSS)誘導(dǎo)的炎癥性腸病(Inflammation bowel disease,IBD)小鼠模型,評(píng)價(jià)了Se-PC對(duì)C57BL小鼠急慢性結(jié)腸炎(Colitis)的緩解作用;觀察了硒藻藍(lán)蛋白(Se-PC)酶解多肽(Se-PP)對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)的抗氧化作用;還用巨噬細(xì)胞RAW264.7研究了Se-PP調(diào)節(jié)LPS誘導(dǎo)的免疫炎癥反應(yīng)機(jī)制。主要結(jié)果如下:

2、　　1.利用飲水添加DSS成功復(fù)制小鼠急、慢性結(jié)腸炎模型,通過灌胃不同劑量Se-PC設(shè)低(L)、中(M)、高(H)劑量實(shí)驗(yàn)組,并設(shè)PBS模型組(DSS+)和正常對(duì)照組(DSS-)。通過檢測(cè)和比較各組小鼠的體重、結(jié)腸長(zhǎng)度、Hb含量、DAI值、和炎癥介質(zhì)釋放水平,以及結(jié)腸組織病理切片染色觀察,發(fā)現(xiàn)Se-PC對(duì)小鼠急、慢性結(jié)腸炎均有明顯緩解實(shí)驗(yàn)作用,且呈明顯的劑量依賴性。此外,EMSA分析發(fā)現(xiàn),Se-PC明顯下調(diào)炎癥結(jié)腸組織中NF-κB的核轉(zhuǎn)

3、移水平,提示Se-PC通過調(diào)節(jié)NF-κB信號(hào)途徑緩解Colitis炎癥反應(yīng)。
　　2.模擬胃腸道環(huán)境體外酶解Se-PC制備Se-PP,發(fā)現(xiàn)胃蛋白酶-胰蛋白酶-胰凝乳蛋白酶聯(lián)合獲得最高水解度,水解多肽抗氧化活性最強(qiáng)。采用tBOOH誘導(dǎo)HUVEC氧化損傷模型探討了Se-PP的抗氧化活性,結(jié)果顯示,Se-PP在50-200μg/mL時(shí),對(duì)細(xì)胞氧化損傷具有明顯抵抗作用,且優(yōu)于不含硒藻藍(lán)蛋白(PC)的對(duì)照酶解多肽(PP),提示硒在其中起協(xié)同

4、作用。
　　3.利用小鼠RAW264.7巨噬細(xì)胞株研究Se-PP對(duì)LPS激活NF-κB和NO生成的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn),盡管Se-PP在100μg/mL處理18 h后,對(duì)iNOS表達(dá)和NO生成有一定上調(diào)作用,但能夠顯著降低核內(nèi)NF-κB水平,并下調(diào)RAW264.7細(xì)胞中LPS激活的iNOS表達(dá),減少NO的釋放。提示Se-PP可能通過調(diào)節(jié)NF-κB信號(hào)影響巨噬細(xì)胞天然免疫炎癥反應(yīng)。
　　綜上所述,Se-PP具有抗氧化活性,對(duì)DSS誘