雙歧桿菌對潰瘍性結腸炎的保護作用及其免疫機制初步研究.pdf

1、目的： 1．建立DSS誘導的Babl/c小鼠UC模型以及雙歧桿菌防治模型，為下一步研究做準備。 2．檢測IECs中TLR2、TLR4．NF-κBp65、IL-1和TNF-α的表達以對其在UC及雙歧桿菌防治UC中的作用加以研究。 3．研究 DCs在UC及雙歧桿菌防治UC中的作用。 方法： 將60只Babl/c小鼠隨即分為三組即正常對照組(N)、DSS誘導組(D)、雙歧桿菌灌腸組(B)。N組不施加作用

2、，D組生理鹽水灌腸14天，并從第8天開始再給以2％的DSS自由飲用；B腸組用雙歧桿菌灌腸14天，并從第8天開始再給以2％的DSS自由飲用。14天后處死小鼠做組織病理切片；制作冰凍切片和石臘切片采用免疫組織化學染色分別檢測腸道中DCs和NF-κBp65的表達；分離IECs提取 IECs中的總RNA與蛋白，用RT-PCR法檢測TLR2、TLR4的表達，用 westernblot檢測NF-κBp65的表達，并且用 Real time RT-P

3、CR法檢測IL-1和INF-α的表達。 結果： 1．D組小鼠從第13天開始出現(xiàn)大便隱血陽性，稀便，到第14天小鼠出現(xiàn)肉眼血便，稀便，而B組除兩例出現(xiàn)大便隱血外其余正常；且病理切片顯示D組小鼠腸道粘膜組織結構紊亂，有潰瘍形成，B組和N組無潰瘍形成，成功建立了UC模型及雙歧桿菌防治模型。 2．RT-PCR檢測顯示：D組與B組IECs內TLR2的表達要高于N組，且D組TLR2的表達要高于B組，結果具有統(tǒng)計學意義；D組T

4、LR4的表達要高于N組和B組，結果具有統(tǒng)計學意義，而B組與N組之間無顯著性差異。 3．免疫組織化學染色顯示D組與B組NF-κBp65的表達要高于N組，且D組要高于B組，結果具有統(tǒng)計學意義；NF-κBp65的western blot檢測結果與免疫組織化學染色結果一致。 4．Real timePCR檢測顯示：D組TNF-α和IL-1的表達要高于N組和B組，結果具有統(tǒng)計學意義而B組和N組之間無顯著性差異。 5．DCs免

5、疫組織化學染色結果顯示D組與B組腸粘膜均有大量的DCs出現(xiàn)，而N組腸粘膜幾乎檢測不到DCs。 結論： 1．在通常的情況下腸道菌群和宿主之間保持著一種動態(tài)的平衡，當腸道菌群和宿主之間的這種平衡被打破(腸道細菌增加尤其是革蘭陰性細菌的增加)時，腸道革蘭陰性菌可以誘導 IECs上TLR4表達的增加，并通過與TLR4的結合引起 IECs內NF-κB通路的持續(xù)激活，進而增加前炎癥因子(TNF+α和IL-1)的表達，最終在腸道的炎癥